單細胞測序技術(shù)的不斷發(fā)展解決了以往群體細胞組學(xué)分析面臨的兩個瓶頸:一是大量細胞的混合測序會掩蓋細胞間的異質(zhì)性;二是傳統(tǒng)的測序技術(shù)需要大量的細胞作為起始,細胞數(shù)目稀有的樣品則難以研究.利用單細胞測序方法不僅能夠揭示組織中的細胞類型和稀有亞群、細胞狀態(tài)和命運的變化,還可以研究細胞數(shù)稀有的珍貴樣品,從而幫助人們理解發(fā)育、衰老和疾病發(fā)展的機制。隨著單細胞轉(zhuǎn)錄組、基因組、表觀遺傳組、蛋白組等各組學(xué)測序技術(shù)的快速發(fā)展,研究者開始將它們相互組合,使得單個細胞或同類細胞的多個組學(xué)數(shù)據(jù)能夠聯(lián)合分析.因此,利用單細胞多組學(xué)技術(shù)能夠更有效地研究細胞在特定時空狀態(tài)下各組學(xué)間的復(fù)雜聯(lián)系,從而揭示細胞狀態(tài)和命運調(diào)控的分子機制。烈冰測序服務(wù)已助力300余篇國際主流期刊研究文章發(fā)表。南京single cell RNA單細胞多組學(xué)多組學(xué)測序

空間轉(zhuǎn)錄組測序的數(shù)據(jù)分析基本分為三個階段：1.數(shù)據(jù)的預(yù)處理部分；2.Spot點陣的分群與定義；3.Spot分群的功能與生物學(xué)價值。每一個部分都不可或缺，其結(jié)果都對后續(xù)的分析結(jié)果有重要影響。由于空間轉(zhuǎn)錄組的序列結(jié)構(gòu)與單細胞轉(zhuǎn)錄組測序的左端序列結(jié)構(gòu)是非常接近的，都是Cellbarcode/SpotBarcode+UMI+捕獲區(qū)域這樣的設(shè)計。右端普遍為捕獲的RNA序列。因此采用單細胞的原始數(shù)據(jù)過濾策略即可，左端可以考慮切下捕獲區(qū)域前的序列區(qū)域作為后續(xù)分析用的序列以減少分析負荷。隨后，采用10X官方的Spatialranger的策略進行后續(xù)分析，解析出位于空間位置中的有效的Spot表達矩陣。南京烈冰科技單細胞多組學(xué)數(shù)據(jù)分析未來，單細胞多組學(xué)測序技術(shù)的策略會繼續(xù)向轉(zhuǎn)錄組結(jié)合其他多個組學(xué)的三組學(xué)甚至四組學(xué)方向發(fā)展。

烈冰科技自主研發(fā)的單細胞云平臺致力于幫助每一位客戶定制化分析數(shù)據(jù)，深入解讀數(shù)據(jù)分析結(jié)果，深入挖掘其背后的生物學(xué)意義；從操作便捷、結(jié)果可視化、分析可追溯、系統(tǒng)穩(wěn)定等方面助力單細胞研究，加速科研進程！此外，烈冰生信團隊根據(jù)豐富的實戰(zhàn)經(jīng)驗為用戶量身打造了一款單細胞測序結(jié)果解讀的神兵利器——單細胞瀏覽器（SingleCellBrowser），不僅可以將海量復(fù)雜的結(jié)果文件可視化，還可以實現(xiàn)分析結(jié)果的三維立體化的展示呈現(xiàn)。專業(yè)的生信代碼交給專業(yè)的烈冰，專業(yè)的生物學(xué)意義交給專業(yè)的您！

基于橋式PCR技術(shù)的簇生成可以將模版鏈迅速擴增成千上萬倍，保證過程中足夠的測序深度。測序時使用特殊標(biāo)記的dNTP：1）堿基上通過敏感鍵修飾上不同的熒光基團，用于區(qū)分ATCG；2）3端使用疊氮基團封閉，保證一次循環(huán)只上一個dNTP。每一輪循環(huán)結(jié)束時，會通過高速熒光顯微鏡記錄熒光圖像，再通入試劑除去熒光基團和疊氮基團，開啟下一循環(huán)。通過分析讀取同一位點的熒光，實時獲取模版鏈的堿基序列。由于過程中使用的化學(xué)反應(yīng)并不可控，隨著循環(huán)數(shù)的增大會出現(xiàn)不同步的情況，因此Illumina的讀長只能限制在200bp左右。利用單細胞多組學(xué)技術(shù)能夠更有效地研究細 胞在特定時空狀態(tài)下各組學(xué)間的復(fù)雜聯(lián)系。

當(dāng)蜂巢孔內(nèi)同時落入細胞和磁珠后，接下去可以往BDCartridge板中加入細胞裂解液對細胞進行裂解，使細胞內(nèi)的RNA與磁珠上的標(biāo)簽進行結(jié)合，完成每個細胞內(nèi)RNA的捕獲和標(biāo)記。這時，再將捕獲了RNA的磁珠進行回收，待所有質(zhì)控結(jié)果確認通過后就可以進行后續(xù)的RNA反轉(zhuǎn)錄、cDNA第二鏈合成等實驗操作。而BDCartridge板則需要再進行一次成像，獲得磁珠收集后的掃描圖，判斷磁珠是否已經(jīng)被有效收集。根據(jù)每一步的質(zhì)控結(jié)果，烈冰科技（NovelBio）單細胞測序?qū)嶒瀳F隊會根據(jù)單細胞分選的實驗結(jié)果生成實驗總結(jié)報告，判斷每一步驟是否通過質(zhì)控，并得到捕獲的單細胞數(shù)量以及雙細胞比例，對整個實驗進行總結(jié)評估。若所有過程通過質(zhì)控，實驗樣本即可進行下一步實驗操作。烈冰生物為您提供一站式全流程高通量測序服務(wù)。無錫單細胞多組學(xué)技術(shù)支持

單一的轉(zhuǎn)錄本研究不能體現(xiàn)生命進程的變化，因此多組學(xué)聯(lián)合分析成為解析生命進程的有力工具。南京single cell RNA單細胞多組學(xué)多組學(xué)測序

單細胞測序?qū)嶒炘贅颖炯毎蠙C分選簽，需要對細胞數(shù)量、細胞活性進行準確判斷，這對SingleCell分選標(biāo)記、建庫、下機數(shù)據(jù)的質(zhì)量都具有著決定性的作用。如若細胞計數(shù)偏高，將會影響建庫的成功率；計數(shù)偏低，則會顯著提高雙細胞的比例；而細胞活率過低，就會使測序數(shù)據(jù)的利用率大打折扣，因此把好單細胞懸液質(zhì)量這一關(guān)尤為重要。而在鋪板過程中，由于不同操作人員手法具有不可避免的差異，不同的液體流速將直接影響單細胞的入孔效果。因此烈冰生物BDRhapsody單細胞分選平臺配套了專門定制的電動移液器，其具有PrimeTreat、CellLoad、BeadLoad、Wash、Lysis、Retrieval多種操作模式，來對應(yīng)各種不同的操作。通過已經(jīng)設(shè)定的程序來控制液體的流速，大幅度降低人為操作習(xí)慣帶來的差異，保證實驗操作的一致性。南京single cell RNA單細胞多組學(xué)多組學(xué)測序

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