翻譯后修飾蛋白組學(xué)分析:在蛋白翻譯后修飾方式的鑒定過(guò)程中,蛋白會(huì)首先被酶切成肽段,然后進(jìn)入質(zhì)譜進(jìn)行分析。通過(guò)質(zhì)譜分析,得到的是一系列肽段的分子質(zhì)量信息。對(duì)于某一個(gè)特定肽段而言,在沒(méi)有發(fā)生任何翻譯后修飾的情況下,其序列信息和分子量是確定的。當(dāng)它發(fā)生了某種翻譯后修飾之后,例如磷酸化修飾,由于序列信息和分子量是確定的,磷酸根的分子量也是確定的。在質(zhì)譜檢測(cè)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)其中的部分肽段的分子量剛好增加了一個(gè)磷酸根的分子量,假設(shè)這個(gè)肽段就發(fā)生了磷酸化修飾,再通過(guò)二級(jí)質(zhì)譜圖進(jìn)行二次確認(rèn)。通過(guò)蛋白質(zhì)翻譯后修飾也進(jìn)一步增加了細(xì)胞通路機(jī)制和生命活動(dòng)的多樣性和復(fù)雜性。北京蛋白質(zhì)亞硝基化修飾組學(xué)鑒定
蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué):蛋白質(zhì)的磷酸化修飾是生物體內(nèi)重要的共價(jià)修飾方式之一。磷酸化修飾本身所具有的簡(jiǎn)單、靈活、可逆的特性,以及磷酸基團(tuán)的供體ATP的易得性,使得磷酸化修飾被真核細(xì)胞所選擇接受成為一種比較普遍的調(diào)控手段。蛋白質(zhì)的磷酸化和去磷酸化這一可逆過(guò)程,幾乎調(diào)節(jié)著包括細(xì)胞的增殖、發(fā)育、分化、細(xì)胞骨架調(diào)控、細(xì)胞凋亡、神經(jīng)活動(dòng)、肌肉收縮、新陳代謝發(fā)生等生命活動(dòng)的所有過(guò)程,并且可逆的蛋白質(zhì)磷酸化是目前所知道的比較主要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)方式。目前已經(jīng)知道有許多人類(lèi)疾病是由于異常的磷酸化修飾所引起,而有些磷酸化修飾卻是某種疾病所導(dǎo)致的后果。廣東蛋白質(zhì)亞硝基化修飾組學(xué)領(lǐng)域質(zhì)譜可以分辨蛋白質(zhì)修飾前和修飾后分子量上的變化。
蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué):翻譯后修飾自下而上分析策略:自下而上蛋白質(zhì)組學(xué)是一種基于肽段分析的技術(shù)。對(duì)于不同類(lèi)型的翻譯后修飾,具體的分析策略存在差異。蛋白質(zhì)的糖基化具有異質(zhì)性。不同的糖鏈可以連接到同一位點(diǎn)上,不同位點(diǎn)可以連接到同一蛋白質(zhì)上的不同糖鏈上。糖基化的異質(zhì)性嚴(yán)重阻礙了糖蛋白的分離和分析。不同糖類(lèi)型的相同蛋白質(zhì),在電泳上會(huì)出現(xiàn)分散的條帶,導(dǎo)致信號(hào)分散。此外,對(duì)低豐度蛋白質(zhì)的識(shí)別性差導(dǎo)致糖蛋白在色譜圖中分離不佳,質(zhì)譜中有一簇分子量不準(zhǔn)確的分辨不清的峰。目前,蛋白糖基化研究的主要策略是利用現(xiàn)有的技術(shù)體系對(duì)糖基化蛋白的糖基化肽段進(jìn)行分離和富集,消除糖基化的異質(zhì)性及其對(duì)質(zhì)譜的影響,標(biāo)記糖基化位點(diǎn)。
蛋白質(zhì)翻譯后修飾有什么生物學(xué)意義?可以使蛋白質(zhì)具有生物活性,可以發(fā)揮相應(yīng)的功能。翻譯是蛋白質(zhì)生物合成(基因表達(dá)中的一部分,基因表達(dá)還包括轉(zhuǎn)錄)過(guò)程中的第二步(轉(zhuǎn)錄為第1步),翻譯是根據(jù)遺傳密碼的中心法則,將成熟的信使RNA分子(由DNA通過(guò)轉(zhuǎn)錄而生成)中“堿基的排列順序”(核苷酸序列)解碼,并生成對(duì)應(yīng)的特定氨基酸序列的過(guò)程。但也有許多轉(zhuǎn)錄生成的RNA,如轉(zhuǎn)運(yùn)RNA(tRNA)、核糖體RNA(rRNA)和小核RNA(snRNA)等并不被翻譯為氨基酸序列。常見(jiàn)的蛋白質(zhì)翻譯后修飾包括磷酸化。
蛋白磷酸化修飾過(guò)程:蛋白磷酸化修飾這一過(guò)程是通過(guò)蛋白激酶催化,將磷酸基團(tuán)從ATP轉(zhuǎn)移到多肽底物的絲氨酸、蘇氨酸,或酪氨酸殘基上。并且磷酸化修飾的過(guò)程是可逆的,去磷酸化反應(yīng)由蛋白磷酸酶催化完成。蛋白磷酸化檢測(cè)方法:Western Blot檢測(cè)方法:Western Blot是檢測(cè)蛋白磷酸化水平的常用方法,主要過(guò)程為先利用SDS-PAGE分離蛋白質(zhì),隨后將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF膜上,然后使用特異性識(shí)別磷酸化蛋白的抗體來(lái)鑒定目標(biāo)蛋白的磷酸化水平。只有被磷酸化修飾的蛋白才會(huì)在相應(yīng)分子質(zhì)量的地方顯現(xiàn)特異性蛋白條帶。乙?;揎検窃撕驼婧松锼灿械囊环N翻譯后修飾類(lèi)型。湖北丙二?;揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)技術(shù)服務(wù)
常見(jiàn)的蛋白質(zhì)翻譯后修飾包括乙?;1本┑鞍踪|(zhì)亞硝基化修飾組學(xué)鑒定
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