定量蛋白質(zhì)組學方法學介紹：Label-free：Label-free定量，即非標記的定量蛋白質(zhì)組學，不需要對比較樣本做特定標記處理，只需要比較特定肽段/蛋白在不同樣品間的色譜質(zhì)譜響應信號便可得到樣品間蛋白表達量的變化，通常用于分析大規(guī)模蛋白鑒定和定量時所產(chǎn)生的質(zhì)譜數(shù)據(jù)。Label-free定量不需要標記處理，操作簡單，可以做任意樣本的總蛋白質(zhì)差異定量，但對實驗操作的穩(wěn)定性、重復性要求較高，準確性也較標記定量差。因此，Label-free技術(shù)適合于大樣本量的定量比較，以及對無法用標記定量實現(xiàn)的實驗設計。對人類而言，蛋白質(zhì)組學的研究終究要服務于人類的健康。TMT／iTRAQ標記定量蛋白質(zhì)組學價格
非標定量法(Label-free)是通過比較質(zhì)譜分析次數(shù)或質(zhì)譜峰強度，分析不同來源樣品蛋白的數(shù)量變化，認為肽段在質(zhì)譜中被捕獲檢測的頻率與其在混合物中的豐度成正相關，因此蛋白質(zhì)被質(zhì)譜檢測的計數(shù)反映了蛋白質(zhì)的豐度，通過適當?shù)臄?shù)學公式可以將質(zhì)譜檢測計數(shù)與蛋白質(zhì)的量聯(lián)系起來,從而對蛋白質(zhì)進行定量。按照其原理主要分為兩種，第1種spectrumcounts類的非標記方法，發(fā)展比較早，已經(jīng)形成多種定量算法，但是主要的原理都是以MS2的鑒定結(jié)果為定量基礎，各種方法的差別在于后期算法在大規(guī)模數(shù)據(jù)上的修正。第二種非標記定量的原理是以MS1為基礎，計算每個肽段的信號強度在LC-MS上的積分。TMT／iTRAQ標記定量蛋白質(zhì)組學價格蛋白質(zhì)組學技術(shù)并帶領生物技術(shù)取得關鍵性的突破。
蛋白質(zhì)組學樣品寄樣要求：動物組織的樣本蛋白量相對較高，送樣量的要求也相對比較寬松，一般提供50~100mg的量即可。此外，組織上有血跡、脂肪、結(jié)締組織的還需要用PBS和組織剪將其清理干凈。送樣前將樣品用液氮速凍5min，放置在-80℃保存，送樣時需要置于干冰環(huán)境中運輸。動物的懸浮培養(yǎng)細胞也是比較熱門的蛋白組學研究對象，如果想做細胞的蛋白組學，起碼需要1×107個細胞，離心后收集，置于-80攝氏度環(huán)境中。蛋白質(zhì)組學，指對某一基因組所表達的所有蛋白質(zhì)及其特征進行大規(guī)模、系統(tǒng)化地研究，以期望在蛋白質(zhì)水平上解釋控制復雜的生命活動的分子網(wǎng)絡。
LabelFree(非標記蛋白質(zhì)組學技術(shù))：應用：1.需要快速在大量樣本中找到差異表達的蛋白組合。2.需要在較短時間以較低成本得到具有提示意義的蛋白表達數(shù)據(jù)。3.需要檢測的樣品蛋白含量低。4.需要檢測相互作用蛋白。技術(shù)特點：1.對質(zhì)譜儀器設備要求較高，色譜和質(zhì)譜需要同時有較好的穩(wěn)定性和重復性。2.需要有特殊的定量分析軟件。3.對樣品中蛋白質(zhì)總量要求較低，實驗周期短，實驗費用低。4.不需要額外并且昂貴的標記試劑，排除了標記過程帶入實驗誤差的風險，同時也不必考慮標記效率的問題。DIA 定量蛋白質(zhì)組學的循環(huán)時間固定，掃描點數(shù)均勻，定量準確度高。
蛋白質(zhì)組學我的介紹：蛋白質(zhì)組學（proteomics）采用高通量和大規(guī)模的研究手段，從整體的角度分析細胞內(nèi)動態(tài)變化的蛋白質(zhì)組成成份、表達水平與修飾狀態(tài)，了解蛋白質(zhì)之間的相互作用與聯(lián)系，揭示蛋白質(zhì)功能與細胞生命活動規(guī)律，之后達到構(gòu)建出細胞的“功能圖”的目的。蛋白質(zhì)作為生命活動的物質(zhì)承擔者、生理功能的執(zhí)行者和生命現(xiàn)象的直接體現(xiàn)者，研究蛋白質(zhì)對闡明生命體的變化機制具有重要作用。蛋白質(zhì)組研究不只可以實現(xiàn)與基因組的關聯(lián)，揭示生命活動的發(fā)生規(guī)律。同樣對人類重大疾病的發(fā)生與發(fā)展的病理機制研究也具有重要作用。生命體的生理、病理過程，藥物和環(huán)境因子的作用都依賴于蛋白質(zhì)，并引起蛋白質(zhì)的變化。蛋白質(zhì)組學研究對提高我國生物醫(yī)學原始創(chuàng)新能力、重大疾病防診治能力和國民健康水平以及新藥研發(fā)能力、生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的發(fā)展具有重大的戰(zhàn)略意義。蛋白質(zhì)組學技術(shù)有電噴霧質(zhì)譜。北京外泌體蛋白質(zhì)組學主要技術(shù)
DIA 定量蛋白質(zhì)組學可以采集所有離子及碎片圖譜，重現(xiàn)性好。TMT／iTRAQ標記定量蛋白質(zhì)組學價格
定量蛋白質(zhì)組學分析（QuantitativeProteomics）是對一個基因組表達的全部蛋白質(zhì)或一個復雜混合體系內(nèi)所有蛋白質(zhì)進行精確鑒定和定量?？捎糜诤Y選和尋找任何因素引起的樣本之間的差異表達蛋白，結(jié)合生物信息學揭示細胞生理病理等功能，同時也可對某些關鍵蛋白進行定性和定量分析。目前定量蛋白質(zhì)組學技術(shù)常見標記（Label）和非標記的（LabelFree）定量策略。定量蛋白質(zhì)組學技術(shù)常見的幾類主要包括：LabelFree定量蛋白組分析、SILAC與免疫共沉淀蛋白互作分析、MRM/PRM定量蛋白組學分析、SILAC/Dimethyl標記定量蛋白組分析、SWATH定量蛋白組學、TMT/iTRAQ/multinotch定量蛋白組學分析。TMT／iTRAQ標記定量蛋白質(zhì)組學價格