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浙江TMT/iTRAQ標記定量蛋白質(zhì)組學一般流程

來源: 發(fā)布時間:2022-03-26

定量蛋白質(zhì)組學技術(shù):TMT定量蛋白組學技術(shù):TMT(TandemMassTags)定量蛋白質(zhì)組學技術(shù)多肽體外標記定量技術(shù)。這種技術(shù)采用多個(2-10)穩(wěn)定同位素標簽,特異性標記多肽的氨基基團進行串聯(lián)質(zhì)譜分析,能夠同時比較多達10種不同樣本中蛋白質(zhì)的相對含量,可用于研究不同病理條件下或者不同發(fā)育階段的組織樣品中蛋白質(zhì)表達水平的差異。iTRAQ定量蛋白組學技術(shù)是多肽體外標記定量技術(shù)。這種技術(shù)同TMT定量蛋白組學技術(shù)相似,可研究不同病理條件下或者不同發(fā)育階段的組織樣品中蛋白質(zhì)表達水平的差異。通過對正常個體及病理個體間的蛋白質(zhì)組比較分析,我們可以找到某些“疾病特異性的蛋白質(zhì)分子”。浙江TMT/iTRAQ標記定量蛋白質(zhì)組學一般流程

PRM靶向蛋白質(zhì)組學:是一種基于Orbitrap為表示的高分辨、高精度質(zhì)譜的離子監(jiān)視技術(shù),首先利用四級桿質(zhì)量分析器的選擇能力,用Q1選擇目標肽段的母離子,隨后在collisioncell中對母離子進行碎裂,然后利用Orbitrap分析器在二級質(zhì)譜中檢測所選擇的母離子窗口內(nèi)的所有碎片信息。這樣能夠?qū)δ繕说鞍踪|(zhì)、目標肽段(如發(fā)生翻譯后修飾的肽段)進行選擇性檢測,即可對目標蛋白質(zhì)/肽段進行相對(一定)定量。從而實現(xiàn)對復雜樣本中的目標蛋白質(zhì)/肽段進行準確地特異性分析。浙江新型修飾蛋白組學檢測多少錢蛋白質(zhì)組的概念指由一個基因組,或一個細胞、組織表達的所有蛋白質(zhì)。

蛋白質(zhì)組學主要以全蛋白組(組織、細胞)、線粒體蛋白組、葉綠體蛋白組和外泌體蛋白組為研究對象,通過對蛋白組進行定性、定量、分子功能分析、通路互作分析和蛋白互作分析,揭示生物學功能、作用機制、疾病診斷的標志物以及預測蛋白的上、下游變化關(guān)系。蛋白質(zhì)組學可以克服核酸水平預測的不確定性、反映核酸翻譯后修飾情況。常用技術(shù):非靶向蛋白組學:蛋白質(zhì)定性(膠條鑒定和溶液鑒定),高通量定量蛋白組(Labelfree、iTRAQ/TMT和DIA定量),多肽組學。

蛋白質(zhì)組學在醫(yī)療和健康方面有什么應用?具體而言,蛋白質(zhì)組學在此類應用中,更多地用于提供高通量蛋白質(zhì)定性定量信息。作為檢測手段的蛋白質(zhì)組學:事實上,在當前的生物醫(yī)學研究和臨床診斷中,蛋白質(zhì)組學相關(guān)技術(shù)有非常多的應用。因為蛋白質(zhì)組學技術(shù)的本質(zhì)(從分析化學角度來看),就是對蛋白質(zhì)的定性定量分析。生物醫(yī)學和臨床診斷中,需要大量表征一種或多種蛋白質(zhì)的含量、氨基酸序列、翻譯后修飾等信息。蛋白質(zhì)組學相關(guān)技術(shù)目前在一小部分]應用中具有獨特優(yōu)勢。有很多蛋白質(zhì)組學的研究者在工業(yè)界和醫(yī)院進行相關(guān)研究和日常工作。很容易發(fā)現(xiàn),當前蛋白質(zhì)組學的臨床應用更多地集中在第二類。第1類的應用更接近于生物醫(yī)學基礎(chǔ)研究,目前還沒有和大部分人的現(xiàn)實生活產(chǎn)生關(guān)系。蛋白組學樣本寄送前是否需要精確計數(shù)或是稱量?

我國科學家已經(jīng)在重大疾病如肝病、維甲酸誘導白血病細胞凋亡啟動模型及維甲酸定向誘導胚胎干細胞向神經(jīng)系統(tǒng)分化的模型等比較蛋白質(zhì)組研究以及一些重要生理和病理體系的蛋白質(zhì)組成分研究方面獲得了重要成就。蛋白質(zhì)組學的重要應用領(lǐng)域有:在臨床疾病中的應用、在微生物蛋白質(zhì)組學中的應用、在植物研究中的應用、在腎臟病學領(lǐng)域的應用。我們通過研究蛋白質(zhì)組,可以為患者提供有用的疾病診斷、診療、預后評估信息;可以早期更為準確的診斷出胰腺病;也可以為AD的診斷、診療藥物的設計和篩選奠定基礎(chǔ)。這項研究技術(shù)其實離我們生活非常近,對我們生命而言尤為重要。近年來,高通量蛋白質(zhì)分離與鑒定技術(shù),如雙向電泳、生物質(zhì)譜、蛋白質(zhì)芯片、酵母雙雜交系統(tǒng)、生物信息學等相繼建立并日趨完善,加速了蛋白質(zhì)組學的發(fā)展。蛋白質(zhì)組意指“一種基因組所表達的全套蛋白質(zhì)”,即包括一種細胞乃至一種生物所表達的全部蛋白質(zhì)。濟南蛋白質(zhì)組學檢測多少錢

定量蛋白質(zhì)組學通過對蛋白質(zhì)的定量分析,以了解基因在不同的生理、病理和逆境條件下的表達情況。浙江TMT/iTRAQ標記定量蛋白質(zhì)組學一般流程

蛋白組學技術(shù):蛋白質(zhì)組學研究的首要任務是建立獲取和分析蛋白質(zhì)的常規(guī)、可靠、有效的技術(shù)。為達到這一要求,就需要樣品準備、數(shù)據(jù)獲取標準化及自動化,也就是要有可重復的高通量的技術(shù)。蛋白質(zhì)組學技術(shù)手段在不斷完善,其工作流程,包括蛋白質(zhì)樣本的制備、分離、定量及鑒定。由雙向凝膠電泳、質(zhì)譜技術(shù)、酵母雙雜交系統(tǒng)、蛋白質(zhì)微陣列技術(shù)、能進行大規(guī)模數(shù)據(jù)處理的計算機系統(tǒng)和軟件、軟電離技術(shù)及生物信息學技術(shù)構(gòu)成了蛋白質(zhì)組學研究的主要技術(shù)體系。其中蛋白質(zhì)組學技術(shù)中的質(zhì)譜技術(shù)是現(xiàn)在比較常用的一種蛋白質(zhì)鑒定技術(shù)。浙江TMT/iTRAQ標記定量蛋白質(zhì)組學一般流程

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