circRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)成環(huán)機(jī)制:circRNA環(huán)化方式分為內(nèi)含子環(huán)化和外顯子環(huán)化。目前主流的成環(huán)機(jī)制可歸類為:依賴于剪切體的索尾插接環(huán)化。在mRNA前體上,通過(guò)連續(xù)的組裝小核核糖體蛋白從而催化外顯子下游的5′供體的位點(diǎn)連接到上游的3′受體的位點(diǎn),索尾插接形成環(huán)化,然后通過(guò)剪切形成circRNA。順式作用元件促進(jìn)circRNA形成。部分circRNA外顯子兩側(cè)的內(nèi)含子中含有反向互補(bǔ)序列,首先在剪切位點(diǎn)上并排形成RNA雙鏈體,再通過(guò)可變剪切形成帶內(nèi)含子和不帶內(nèi)含子兩種不同的circRNA。或者外顯子內(nèi)部以及兩側(cè)的內(nèi)含子可以競(jìng)爭(zhēng)進(jìn)行RNA配對(duì),然后通過(guò)可變剪切形成不同類型的circRNA。轉(zhuǎn)錄組學(xué)無(wú)需預(yù)先設(shè)計(jì)特異性探針。武漢circ RNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究
單細(xì)胞RNA-seq轉(zhuǎn)錄組學(xué)工作流程:?jiǎn)渭?xì)胞RNA測(cè)序等高通量單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)通常從針對(duì)不同瘤和組織類型(解離、分選和分離細(xì)胞等)量身定制的實(shí)驗(yàn)工作流程開(kāi)始,然后產(chǎn)生可以比對(duì)的序列,量化、質(zhì)量控制(QC)過(guò)濾和以不同方式標(biāo)準(zhǔn)化,以實(shí)現(xiàn)許多下游計(jì)算分析,例如聚類分析以識(shí)別轉(zhuǎn)錄不同的細(xì)胞類型和亞群,等位基因分析以識(shí)別單核苷酸變異(SNV,用星號(hào)表示)或拷貝數(shù)變體(CNV)、軌跡分析、剪接檢測(cè)或瘤的微環(huán)境(TME)相互作用的推斷中。單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)數(shù)據(jù)的分析通常因精心設(shè)計(jì)的研究設(shè)計(jì)而變得復(fù)雜,這些設(shè)計(jì)可能包括來(lái)自患病和未患病個(gè)體的樣本、在不同時(shí)間點(diǎn)(例如,診療前和診療后)收集的同一個(gè)人的多個(gè)樣本,或來(lái)自表現(xiàn)出不同疾病狀態(tài)的不同個(gè)體的多個(gè)樣本。這樣的研究設(shè)計(jì)可以發(fā)現(xiàn)患者共享的轉(zhuǎn)錄特征,這些特征可能定義疾病中常見(jiàn)的干擾分子途徑。杭州單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)質(zhì)譜鑒定基于高通量測(cè)序平臺(tái)的轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)序技術(shù)能夠全方面獲得物種特定組織的轉(zhuǎn)錄本信息。
轉(zhuǎn)錄組分析是目前應(yīng)用比較廣的高通量測(cè)序分析技術(shù)之一。常見(jiàn)設(shè)計(jì)是不同樣品之間比較,尋找差異基因、標(biāo)志基因、協(xié)同變化基因、差異剪接和新轉(zhuǎn)錄本,并進(jìn)行結(jié)果可視化、功能注釋和網(wǎng)絡(luò)分析等。轉(zhuǎn)錄組的測(cè)序分析也相對(duì)成熟,從RNA提取、構(gòu)建文庫(kù)、上機(jī)測(cè)序再到結(jié)果解析既可以自己完成,又可以在專業(yè)公司進(jìn)行。概括來(lái)看轉(zhuǎn)錄組的分析流程比較簡(jiǎn)單,序列比對(duì)-轉(zhuǎn)錄本拼接(可選)-表達(dá)定量-差異基因-功能富集-定制分析。整個(gè)環(huán)節(jié)清晰流暢,可以作為剛開(kāi)始接觸高通量測(cè)序?qū)W習(xí)比較合適的技術(shù)之一。
單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)試步驟:第1步就是把單個(gè)細(xì)胞分選出來(lái)。分選的方式也比較多,物理切割,酶消化,F(xiàn)ACS分選等。假如已經(jīng)分到了一個(gè)單細(xì)胞,跟常規(guī)的轉(zhuǎn)錄組步驟上是一樣的。下一步就是把單細(xì)胞里的RNA提取出來(lái)去建庫(kù)測(cè)序。但是一個(gè)細(xì)胞里的RNA含量是比較少的,難建庫(kù)成功。這個(gè)里面“量”的概念很有意思。比如說(shuō)單細(xì)胞量少,需要特殊處理。因?yàn)閱渭?xì)胞里面RNA的量少,所以說(shuō)整個(gè)富集的過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)一部分基因在一個(gè)細(xì)胞里能檢測(cè)到,在另外一個(gè)細(xì)胞里面檢測(cè)不到,而每個(gè)細(xì)胞里面的檢測(cè)存在一個(gè)隨機(jī)性,同時(shí)單細(xì)胞測(cè)序深度比較低,所以說(shuō)分析時(shí)相比于普通轉(zhuǎn)錄組有一些是需要特別注意,但整體的分析思路是類似的。轉(zhuǎn)錄組學(xué)可以準(zhǔn)確地識(shí)別可變剪切和融合基因。
RNA-seq轉(zhuǎn)錄組學(xué):也被稱為整個(gè)轉(zhuǎn)錄組鳥(niǎo)測(cè)序(wts)。RNA-seq包含三個(gè)步驟:測(cè)序文庫(kù)的建立,在特定平臺(tái)中測(cè)序和生物信息學(xué)分析。RNA-Seq是一種基于NGS技術(shù)的新的轉(zhuǎn)錄分析方法。采用NGS技術(shù)對(duì)從感興趣的RNA樣本序列反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA進(jìn)行測(cè)序。簡(jiǎn)而言之,就是對(duì)剪切變體、轉(zhuǎn)錄后RNA編輯、內(nèi)含子表達(dá)水平和特定等位基因的表達(dá)情況進(jìn)行定性和定量分析。RNA-Seq原理:在對(duì)基因組測(cè)序和分析研究的同時(shí),復(fù)雜的轉(zhuǎn)錄組研究也普遍發(fā)展起來(lái)。利用高通量測(cè)序技術(shù)平臺(tái)分析轉(zhuǎn)錄組的結(jié)構(gòu)和表達(dá)水平情況,更能挖掘未知轉(zhuǎn)錄本和稀有轉(zhuǎn)錄本信息,精確地識(shí)別RNA的選擇性剪切以及編碼序列的單核苷酸多態(tài)性(SPN),進(jìn)一步解析復(fù)雜的轉(zhuǎn)錄組信息。轉(zhuǎn)錄組學(xué)即一個(gè)活細(xì)胞所能轉(zhuǎn)錄出來(lái)的所有RNA的總和。杭州單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)質(zhì)譜鑒定
轉(zhuǎn)錄組具有組織特異性的特點(diǎn)。武漢circ RNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究
轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)路線及研究意義:轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的研究對(duì)象為特定細(xì)胞在某一功能狀態(tài)下所能轉(zhuǎn)錄出來(lái)的所有RNA的總和,包括mRNA和非編碼RNA。相對(duì)于傳統(tǒng)的芯片雜交平臺(tái),轉(zhuǎn)錄組測(cè)序無(wú)需預(yù)先針對(duì)已知序列設(shè)計(jì)探針,即可對(duì)任意物種的整體轉(zhuǎn)錄活動(dòng)進(jìn)行檢測(cè),提供更準(zhǔn)確的數(shù)字化信號(hào),更高的檢測(cè)通量以及更普遍的檢測(cè)范圍,是目前深入研究轉(zhuǎn)錄組復(fù)雜性的強(qiáng)大工具?;诟咄繙y(cè)序平臺(tái)的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)能夠全方面獲得物種特定組織的轉(zhuǎn)錄本信息,從而進(jìn)行基因表達(dá)水平研究、新轉(zhuǎn)錄本發(fā)現(xiàn)研究、轉(zhuǎn)錄本結(jié)構(gòu)變異研究等。武漢circ RNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究
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