轉(zhuǎn)錄組及轉(zhuǎn)錄組測序(RNA-seq):轉(zhuǎn)錄組即特定細胞在某一功能狀態(tài)下所能轉(zhuǎn)錄出來的所有RNA的總和,包括mRNA和非編碼RNA。轉(zhuǎn)錄組測序(RNA-seq)主要通過高通量測序研究特定組織或細胞在某個時期轉(zhuǎn)錄出來的mRNA的表達量,進而對相關基因和表型的關系進行分析。本質(zhì)上講RNA-seq就是在用一種新的方法實現(xiàn)“基因決定性狀”的經(jīng)典思路。在RNA-seq之前用于研究基因組表達分析的主要技術是基因芯片,不過由于高通量測序成本的下降,RNA-seq的運用愈來愈普遍。轉(zhuǎn)錄組學可應用于基因點突變及多態(tài)性檢測。上海宏轉(zhuǎn)錄學組鑒定
circRNA轉(zhuǎn)錄組學:是一類具有閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)的非編碼RNA分子,沒有5′帽子結(jié)構(gòu)和3′poly(A)結(jié)構(gòu),主要位于細胞質(zhì)或儲存于外泌體中,不受RNA外切酶影響,表達更穩(wěn)定且不易降解,已被證明普遍存在于多種真核生物體內(nèi)[1]。大多數(shù)circRNA是由外顯子環(huán)化而成,也有部分circRNA是由內(nèi)含子環(huán)化而成的套索結(jié)構(gòu)。同時由于circRNA含有大量的miRNA應答原件(MREs),能與AGO蛋白形成RNA誘導沉默復合體(RISC)的催化關鍵,然后導致circRNA降解。根據(jù)來源,circRNA可大致分為四類:全外顯子型的circRNA,內(nèi)含子和外顯子組合的EIcircRNA,內(nèi)含子組成的套索型ciRNA,由病毒RNA基因組、tRNA、rRNA、snRNA等環(huán)化產(chǎn)生的circRNA。杭州單細胞轉(zhuǎn)錄組學定量分析轉(zhuǎn)錄組學可以直接測定每個轉(zhuǎn)錄本單核苷酸分辨率的準確度。
全轉(zhuǎn)錄組學測序技術優(yōu)勢:文庫優(yōu)化:針對不同長度的序列采用兩種文庫構(gòu)建方法,采用去核糖體的鏈特異性文庫可以獲得mRNA、lncRNA和circRNA的序列信息。數(shù)據(jù)全:全轉(zhuǎn)錄組測序完成后可獲取4類主要RNA(miRNA,mRNA,lncRNA,circRNA)數(shù)據(jù),可對這些數(shù)據(jù)進行標準分析及整合分析。關聯(lián)全:通過對mRNA/miRNA/lncRNA/circRN序列測定及后續(xù)分析,深入開展全轉(zhuǎn)錄組調(diào)控網(wǎng)絡(ceRNA網(wǎng)絡)分析。樣本類型:細胞,組織,體液、血清、血漿、全血,總RNA等。建議總RNA起始量:>15μg,濃度≥200ng/μL)。
全轉(zhuǎn)錄組測序為什么需要構(gòu)建兩個文庫?全轉(zhuǎn)錄組測序需要構(gòu)建2個測序文庫,一個小RNA文庫和一個去除核糖體RNA的鏈特異性文庫,然后分別上機測序。小RNA長度較短,一般小于50nt,采用測序策略為50SE。其他三類RNA序列一般大于200,通常在1000以上,可達幾萬,通過片段化構(gòu)建150PE測序文庫。然后小RNA文庫可以獲得miRNA序列信息,去核糖體的鏈特異性文庫可以獲得mRNA、lncRNA和circRNA的序列信息。轉(zhuǎn)錄組學即特定細胞在某一功能狀態(tài)下轉(zhuǎn)錄出來的所有RNA的總和,包括mRNA和非編碼RNA。轉(zhuǎn)錄學組測序能夠提供更高的檢測通量。
轉(zhuǎn)錄組學和基因組學目前有實用價值嗎?二者實用價值非常大,尤其是對有瘤的患者的醫(yī)治,簡直顛覆了傳統(tǒng)醫(yī)治的模式。轉(zhuǎn)錄組和基因組月在生物學研究中有著重要價值。例如研究某個基因功能的時候,可以構(gòu)建該基因的敲除或者過表達生物,然后對比野生型進行轉(zhuǎn)錄組分析看看該基因涉及什么表達網(wǎng)絡。此外在醫(yī)學方面的應用也很大,例如在有的瘤病人中進行基因組學測序和分析能夠了解其中的發(fā)生的發(fā)展的驅(qū)動基因,然后能根據(jù)發(fā)展的驅(qū)動基因研究靶向藥物,從而推動瘤的藥物研發(fā)和醫(yī)治!轉(zhuǎn)錄組具有時間特異性的特點。杭州高通量轉(zhuǎn)錄組學分析
普通轉(zhuǎn)錄組測序主要適用于不同的生長階段或者發(fā)育過程。上海宏轉(zhuǎn)錄學組鑒定
轉(zhuǎn)錄組學(transcriptomics)是功能基因組學(FunctionalGenomics)研究的重要組成部分,是一門在整體水平上研究細胞中所有基因轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄調(diào)控規(guī)律的學科。隨著人類基因組計劃HGP(HumanGenomeProject)的完成,科學家也逐漸認識到對基因結(jié)構(gòu)序列的研究只是基因組學研究的一部分,并不能揭示所有的生命奧秘,所以接下來需要解決的問題是:研究這些基因序列的功能、參與的生命過程、表達調(diào)控方式,以及這些基因在不同的時空條件下的表達差異等。這些問題都需要功能基因組學技術來解決,而轉(zhuǎn)錄組學技術是功能基因組學研究的重要組成部分。對基因及其轉(zhuǎn)錄表達產(chǎn)物功能研究的功能基因組學,將為疾病控制和新藥開發(fā)、作物和畜禽品種的改良提供新思路,為人類解決健康問題、食物問題、能源問題和環(huán)境問題提供新方法。上海宏轉(zhuǎn)錄學組鑒定
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