芯棄疾JX-8B數(shù)字ELISA產(chǎn)品每個生物實驗室都用得起的單分子免疫檢測我們的方法利用了亞飛克爾反應(yīng)室陣列(圖1C)我們稱之為單分子陣列(SiMoA)——可以分離和檢測單個酶分子20-24。這種方法借鑒了Walt等人20-23的工作陣列用于研究單個酶的動力學(xué)和抑制作用。我們的目標(biāo)是利用捕獲和檢測單個酶的能力來檢測用酶標(biāo)記的單個蛋白質(zhì)分子。在這個單分子免疫測定的第一步(圖1A),在微球(直徑μm)上形成一個三明治抗體復(fù)合物,結(jié)合的復(fù)合物用酶標(biāo)記,如同常規(guī)的基于微球的ELISA。當(dāng)測定含有極低濃度蛋白質(zhì)的樣品,蛋白質(zhì)的比值分子(以及由此產(chǎn)生的酶標(biāo)記復(fù)合物)與微球的比例很?。ㄍǔP∮?:1),因此含有標(biāo)記免疫復(fù)合物的微球百分比遵循泊松分布,導(dǎo)致單個微球上存在單一免疫復(fù)合物。例如,如果在(3000個分子)的蛋白質(zhì)中捕獲并標(biāo)記了50μM的蛋白質(zhì),并且在200,000個微球上進(jìn)行標(biāo)記,則珠子,然后,。無法檢測到這些低數(shù)量的酶使用標(biāo)準(zhǔn)檢測技術(shù)(例如,平板閱讀器)的標(biāo)簽,因為熒光染料由每種酶生成的產(chǎn)物擴(kuò)散到一個大卵試驗體積(通常為),并進(jìn)入其中需要數(shù)十萬種酶標(biāo)簽才能產(chǎn)生高于該水平的熒光信號背景。芯棄疾JX-8B簡易版單分子ELISA檢測產(chǎn)品,超敏檢測,常規(guī)試劑可輕松達(dá)到0.2pg!單分子技術(shù)數(shù)字ELISA極速檢測
創(chuàng)新性的解決方案:芯棄疾JX-8B數(shù)字ELISA;使用新型的fg級超敏免疫檢測simoa單分子產(chǎn)品原理;
它是一種DVD大小的圓盤,由24個陣列組成,每個陣列包含240微米大小的微孔,這些微孔呈徑向排列,以便使用藍(lán)光制造工藝和儀器內(nèi)的液體處理并行處理。圖2B顯示了集成陣列及其相關(guān)流體通道的設(shè)計。每個陣列由216,000個40飛升大小的微孔組成,以六邊形緊密排列模式排列在平面表面的3×4毫米區(qū)域內(nèi)。每個微孔的標(biāo)稱尺寸為4.25μm直徑、3.25μm深度和8μ米中心間距。流體通道深0.5毫米,通道和流體入口端口的總體積為74μLto,可容納珠子和密封油溶液。通道中包含一個收縮部分以減少液體回流。微珠的分級是西莫亞技術(shù)的關(guān)鍵要求,微孔的幾何形狀足以容納單個微珠(2.7μmdiameter;以下簡稱珠子)。西莫亞圓盤由環(huán)烯烴共聚物(COP)制造,因其具有高通量注塑成型的適應(yīng)性,且成本低廉。具有良好的化學(xué)、生物和光學(xué)性能 高科技數(shù)字ELISA快速檢測芯棄疾單分子芯片依托單分散陣列化技術(shù),實現(xiàn)飛克級高靈敏檢測,可捕獲數(shù)十萬反應(yīng)磁珠。
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每個生物實驗室都用得起的單分子免疫檢測
由于活性珠子的百分比接近50%(酶與微球的比例大于~1:1.5),然而,使用圖像分析軟件區(qū)分“開啟”和“關(guān)閉”孔變得具有挑戰(zhàn)性,我們達(dá)到了數(shù)字動態(tài)范圍的實際上限。例如,圖2中7fM(~45%活性)的信號偏離了線性。因此,這里使用50,000個孔展示的數(shù)字線性動態(tài)范圍是從3.5fM到350zM,即大約四個對數(shù)單位。前提是蛋白質(zhì)使用適當(dāng)?shù)拿笣舛冗M(jìn)行標(biāo)記,這種動態(tài)范圍對于許多臨床應(yīng)用來說是足夠的
超多重檢測的臨床數(shù)據(jù)價值:標(biāo)記物組合的精細(xì)篩選,超多重檢測芯片通過21項指標(biāo)的同步檢測,為疾病診斷提供了多維數(shù)據(jù)支持。在肺*普查中,同時分析29種標(biāo)記物的表達(dá)模式,可構(gòu)建特異性>80%的三聯(lián)檢測模型(如CEA+SA+CA242),較單一指標(biāo)檢測準(zhǔn)確率提升40%。在炎癥反應(yīng)評估中,IL-6、IL-8、TNF-α等多因子聯(lián)合分析,可精細(xì)判斷***類型與嚴(yán)重程度,指導(dǎo)個體化治療方案。該芯片的高通量特性還支持大規(guī)模隊列研究,通過機(jī)器學(xué)習(xí)算法挖掘標(biāo)記物組合的潛在關(guān)聯(lián),為精細(xì)醫(yī)療中的生物標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)提供了強(qiáng)大的數(shù)據(jù)分析基礎(chǔ),推動檢測技術(shù)從單一指標(biāo)診斷向多維度精細(xì)分型升級。新型的單分子檢測方法的普及版;
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動力學(xué)上,對于200,000個微球分散在100μL中,珠子之間的平均距離約為80μm。大小為TNF-α和PSA(分別為17.3和30kDa)的蛋白質(zhì)將在不到1min的時間內(nèi)擴(kuò)散80μm。表明,在2小時的孵育過程中,蛋白質(zhì)分子的捕獲不會受到限制動力學(xué)上。其次,必須有足夠的珠子被加載到陣列上以限制泊松噪聲。200,000個珠子加載到50,000孔陣列中,通常會導(dǎo)致20,000–30,000個微球被困在1mL孔中。對于典型的背景信號為1%活性微球(見下文),這種裝載導(dǎo)致背景信號為200-300個活性微球檢測到,對應(yīng)于泊松噪聲的可接受變異系數(shù)(CV)為6-7%。第三,過高的微球濃度可能導(dǎo)致:a)非特異性結(jié)合增加,降低信噪比;以及b)分析物與微球的比例過低,導(dǎo)致活性微球的比例過低,從而導(dǎo)致泊松噪聲引起的高CV。這些因素的平衡NatBiotechnol.作者手稿;可在PMC2010年12月1日獲得。Rissin等人第5頁因素意味著每100μLoftest樣品含有20萬到100萬顆珠子是比較好的數(shù)字ELISA。同時,為了獲得可接受的背景信號(1%)和泊松噪聲)。 芯棄疾單分子ELISA檢測試劑盒,多重超敏檢測,多重指標(biāo)也能檢測到亞皮克級!醫(yī)療檢測數(shù)字ELISA快速檢測
數(shù)字 ELISA 芯片標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)流程嚴(yán)格,成品質(zhì)檢全檢,良品率穩(wěn)定在 98% 以上。單分子技術(shù)數(shù)字ELISA極速檢測
自動化檢測與數(shù)據(jù)算法的深度融合:芯棄疾芯片搭載四參數(shù)Logistic曲線擬合(方程:y=(A-D)/[1+(x/C)^B]+D)與二次回歸算法(y=a+bx+cx2),確保熒光信號與濃度的高度線性關(guān)聯(lián)(r2≥0.999)。以IL-6檢測為例,自動版設(shè)備通過AI驅(qū)動圖像分析(CNN網(wǎng)絡(luò)),識別磁珠熒光強(qiáng)度(CV<3%),比較低檢測限達(dá)0.5pg/mL,較手動操作靈敏度提升2倍。在質(zhì)量控制中,芯片內(nèi)置內(nèi)參校準(zhǔn)通道(如β-actin),自動校正批次間差異,使檢測重復(fù)性(CV<5%)達(dá)到ISO15189標(biāo)準(zhǔn)。此外,數(shù)據(jù)平臺支持云端存儲與多中心結(jié)果比對,為大規(guī)模流行病學(xué)研究(如10萬人隊列)提供標(biāo)準(zhǔn)化數(shù)據(jù)支持。單分子技術(shù)數(shù)字ELISA極速檢測