pirb的功能和下游抑制性信號(hào)通路仍然未被闡明,因此迫切需要pirb的細(xì)胞和動(dòng)物模型。目前對(duì)于pirb基因功能的研究,多采用可溶性的pirb的胞外段(pirbextracellularpeptide,pep)和抑制劑,或者采用慢病毒轉(zhuǎn)染。前者受到是否能夠透過血腦屏障和抑制劑效率的影響,后者慢病毒轉(zhuǎn)染在原代細(xì)胞和在體的轉(zhuǎn)染效率比較低,使研究pirb的功能受到極大的限制。為解決這些問題,我們通過crispr/cas9技術(shù)建立了pirb基因敲入小鼠,將pirb基因敲入c57bl/6j的rosa26位點(diǎn),為研究pirb在免疫系統(tǒng)或者神經(jīng)系統(tǒng)的作用和機(jī)制提供了很好的工具。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:本發(fā)明的目的在于提供pirb基因敲入的小鼠動(dòng)物模型。上海東寰提供動(dòng)物模型構(gòu)建過程中的原始實(shí)驗(yàn)記錄及數(shù)據(jù)圖片。靜安區(qū)泌尿疾病動(dòng)物模型建模
建立一種理想的腰椎間盤突出的動(dòng)物模型對(duì)本病的機(jī)制研究和臨床防治具有重要意義?,F(xiàn)有模型對(duì)腰椎間盤突出癥的模擬均存在明顯不足,或與臨床實(shí)際病變部位有一定差距,如慢性坐骨神經(jīng)結(jié)扎模型;或操作難度大,對(duì)動(dòng)物損傷重,如自體髓核移植模型,選擇性神經(jīng)根結(jié)扎模型。因此,急需一種新的操作簡(jiǎn)單,重復(fù)率高,穩(wěn)定且能準(zhǔn)確模擬腰椎間盤突出后癥狀的動(dòng)物模型。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:為了建立一種操作簡(jiǎn)單,穩(wěn)定好且能準(zhǔn)確模擬腰椎間盤突出后癥狀的動(dòng)物模型,本發(fā)明提供了一種大鼠慢性背根神經(jīng)壓迫模型的制備方法。其包括以下步驟:步驟一、麻醉大鼠;步驟二、于大鼠腰4到骶1水平左側(cè)或右側(cè)作縱行切口,切開皮膚,鈍性分離椎旁肌,暴露腰4椎間孔和腰5椎間孔;步驟三、將壓迫元件插入到左側(cè)或右側(cè)腰4椎間孔及腰5椎間孔中,得到大鼠慢性背根神經(jīng)壓迫模型。其中,步驟一具體為:腹腔注射1%戊巴比妥鈉(40mg/kg)麻醉大鼠后,將大鼠背部剃毛,碘伏消毒背部皮膚,俯臥位固定于動(dòng)物手術(shù)臺(tái)上,鋪無菌巾。在一個(gè)具體實(shí)施方式中,壓迫元件為l型棒;步驟三具體為:將2根l型棒的***端分別插入到左側(cè)或右側(cè)腰4椎間孔及腰5椎間孔中,l型棒的第二端置于腰4椎間孔及腰5椎間孔外。疾病動(dòng)物模型建模價(jià)格歡迎致電咨詢疾病動(dòng)物模型建模。
代謝組學(xué)的研究對(duì)象大都是相對(duì)分子量在1000以內(nèi)的小分子物質(zhì),因此常用的血液樣本在取樣后,應(yīng)小心操作,防止溶血,盡快分離出血清,分置于溫環(huán)境下保存。由于用于病理實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物組織采集相對(duì)其他樣品的采集,操作更繁瑣,在處理過程中許多細(xì)節(jié)容易忽略,造成數(shù)據(jù)不完美(甚至不能用)。因此接下來將重點(diǎn)介紹組織樣品采集的注意事項(xiàng)及其固定。組織樣品采集注意事項(xiàng)組織應(yīng)新鮮,操作時(shí)間盡可能短,否則細(xì)胞發(fā)生死后變化、自融及現(xiàn)象。是動(dòng)物心臟還在跳動(dòng)時(shí)采集,樣本取出后在5分鐘以內(nèi)置于固定液內(nèi),避免長(zhǎng)時(shí)間暴露在空氣環(huán)境中。組織塊盡量小而薄。組織塊的厚度以不超過5mm為宜,較為理想的厚度為2mm左右,主要目的是使固定液迅速而均勻的滲入組織塊內(nèi)部。勿使組織塊受擠壓。在采集過程中,應(yīng)盡量選擇較為鋒利的手術(shù)器械,如手術(shù)刀片等,避免操作過程中擠壓挫傷標(biāo)本。擠壓過的組織均不可用。固定液的量一般以組織塊大小的20倍為宜,組織能夠在容器內(nèi)自由移動(dòng)。盡量保持組織的原有形態(tài)。新鮮組織經(jīng)固定后,或多或少產(chǎn)生收縮現(xiàn)象(如胃腸),為此可將組織展平,以盡可能維持原形。保持組織清潔。組織塊上如有血液、污物、粘液、食物、糞便等,可用生理鹽水沖洗。
動(dòng)物購(gòu)買的途徑、安置的地點(diǎn),飲食管理(一般實(shí)驗(yàn)室會(huì)有動(dòng)物房,也可以從其他地方購(gòu)買),動(dòng)物免疫證明、倫理證明需要提前準(zhǔn)備好。實(shí)驗(yàn)相關(guān)的試劑和藥物:比如造模藥物和器械,動(dòng)物干預(yù)所需藥物,陽物選擇及購(gòu)買(有些藥物購(gòu)買很困難,必須通過特殊程序才能買到)。如果涉及到有創(chuàng)操作,要提前準(zhǔn)備好物(建議提前購(gòu)買),手術(shù)器械。需要了解自身實(shí)驗(yàn)平臺(tái)能完成哪些技術(shù)(常見的有組織病理染色、WesternBlot、PCR等),實(shí)驗(yàn)儀器是否需要預(yù)約使用。如果需要外送生物公司檢測(cè),需要提前聯(lián)系好商家,以及了解清楚樣本如何獲取,如何運(yùn)輸。飼養(yǎng)動(dòng)物及干預(yù)動(dòng)物購(gòu)買后需要將時(shí)間節(jié)點(diǎn)提前規(guī)劃好,比如,周需要做什么?測(cè)量體重?觀察飲食?測(cè)量需要的指標(biāo)?中間有無特殊操作?比如灌胃、測(cè)量體重、做CT檢測(cè)、取血?……第幾周取材?取材需要哪些組織?預(yù)實(shí)驗(yàn)方案就要提前設(shè)計(jì)清楚以上內(nèi)容。取材及樣品準(zhǔn)備取材需要提前到動(dòng)物房禁食、稱體重、取出動(dòng)物、手術(shù)器械的消毒、組織固定所需要的試劑和EP管,WesternBlot和PCR所需要的樣本儲(chǔ)存條件。比如凍存管、EP管,是否需要冰塊?是否需要液氮?取材當(dāng)天需要多少人?是否需要請(qǐng)人幫忙?如果所需要取出的樣本較多,建議大家請(qǐng)人一起幫忙。動(dòng)物模型的意義和優(yōu)越性!
動(dòng)物模型名稱:卵清蛋白聯(lián)合氫氧化鋁致支氣管***豚鼠模型2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種屬:豚鼠3、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物性別:雌雄不限4、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物年齡:7~8周齡5、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重:250~350g6、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境:SPF級(jí)。1、實(shí)驗(yàn)方法:卵清蛋白聯(lián)合氫氧化鋁誘導(dǎo)。每只豚鼠腹腔注射100μg卵清蛋白(OVA)+30mg氫氧化鋁(Al(OH)3)致敏。***次致敏后第5天再致敏1次,共2次。***一次致敏后第21d開始采用超聲霧化器噴霧10μgOVA/只,豚鼠置于一直徑約50cm的有蓋大圓盆中,給藥過程中對(duì)盆內(nèi)通O2。2、檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn):使用OVA噴霧激發(fā)后癥狀觀察,豚鼠出現(xiàn)不同程度的呼吸急促、咳嗽、抓癢、甚至抽搐等支氣管***癥狀,表明成功構(gòu)建了豚鼠***模型。動(dòng)物模型的優(yōu)越性主要表現(xiàn)在以下幾下方面!呼吸疾病動(dòng)物模型建模價(jià)格
如何定義好的小鼠疾病模型?靜安區(qū)泌尿疾病動(dòng)物模型建模
本能發(fā)明的另一目的是公開了如上所述的方法制備的鼠慢性背根神經(jīng)壓迫模型的用途是將該模型用于腰椎間盤突出***方法研究和/或影像學(xué)檢測(cè)研究。進(jìn)一步地,該模型用于與磁性相關(guān)的***和/或檢測(cè)方面的研究,比如經(jīng)顱磁刺激和核磁共振。本發(fā)明利用壓迫元件插入腰椎椎間孔,模擬腰椎間盤突出后突出物對(duì)神經(jīng)根的持續(xù)慢性的機(jī)械壓迫癥狀,有益效果有:1.應(yīng)用機(jī)械壓迫神經(jīng)根模擬腰椎間盤突出病理,癥狀的病因?qū)W與臨床情況接近;2.相關(guān)的疼痛行為類似于特定的慢性疼痛癥狀,且易于客觀測(cè)量;3.制備方法簡(jiǎn)單,對(duì)動(dòng)物損傷小,穩(wěn)定性好,成功率高;4.造模關(guān)鍵材料壓迫元件不受磁場(chǎng)干擾,無在磁場(chǎng)作用下移位風(fēng)險(xiǎn),有利于后續(xù)對(duì)動(dòng)物進(jìn)行磁療,經(jīng)顱磁刺激等***及核磁共振等檢查;5.造模關(guān)鍵材料壓迫元件不影響磁場(chǎng),不會(huì)對(duì)***儀器和核磁共振等儀器產(chǎn)生不良影響;6.此方法獲得的模型由于采用了h62黃銅或聚乳酸材料制備的壓迫元件,使得研究方法與檢測(cè)方法不受磁場(chǎng)作用限制,豐富了腰椎間盤突出臨床前研究的***方法及影像學(xué)檢測(cè),為臨床研究提供理論依據(jù)。以下將結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明,以充分說明本發(fā)明的目的、技術(shù)特征和技術(shù)效果。附圖說明圖1是壓迫元件插入椎間孔的結(jié)構(gòu)示意圖。靜安區(qū)泌尿疾病動(dòng)物模型建模