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烈冰科技單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序

來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-07-22

單細(xì)胞測序龐大的數(shù)據(jù)烈冰生信團(tuán)隊(duì)傾情研發(fā)的NovelBrain?生信大數(shù)據(jù)分析平臺(tái),可實(shí)現(xiàn)零代碼操作、簡單方便:單細(xì)胞瀏覽器的操作簡單,不需要命令行操作。簡單拖拽、設(shè)置參數(shù)即可運(yùn)行,即使生信0基礎(chǔ)用戶也可以運(yùn)用自如;可視化展示海量結(jié)果文件:可視化展示Cluster的基因數(shù),UMI數(shù)量、線粒體RNA占比信息;以及不同Cluster對應(yīng)的細(xì)胞數(shù)量、基因表達(dá)量、RNA表達(dá)量、樣本細(xì)胞分布、線粒體RNA表達(dá)量等;3D立體展示,文章動(dòng)圖先人一步:單細(xì)胞瀏覽器針對t-SNE圖、UMAP圖和pseudotime結(jié)果進(jìn)行三維立體展示,更加直觀立體的觀察細(xì)胞分布和聚類情況。基于磁珠Barcode和UMI及polyT的探針結(jié)構(gòu),精細(xì)區(qū)分上萬個(gè)細(xì)胞中mRNA的來源及表達(dá)豐度。烈冰科技單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序

單細(xì)胞測序方法不但改進(jìn)了實(shí)驗(yàn)過程,還幫助科學(xué)家在健康和疾病研究的關(guān)鍵領(lǐng)域取得新進(jìn)展。那些過去從轉(zhuǎn)錄平均值或單項(xiàng)參數(shù)讀取中無法獲得的新發(fā)現(xiàn)正在改變我們對傳染病、神經(jīng)退行性疾病等疾病的認(rèn)識(shí)。從鑒定新的細(xì)胞類型和狀態(tài),到揭開疾病用藥應(yīng)答和耐藥的潛在機(jī)制,單細(xì)胞測序正在推動(dòng)突破性的研究,有望改變生物學(xué)和醫(yī)療。無論是無法解釋的疾病,還是人體或自然界中尚未探索的系統(tǒng),曾經(jīng)模糊的東西正變得越來越清晰。隨著我們邁向科學(xué)的未來,我們手頭的工具就像伽利略的望遠(yuǎn)鏡一樣能夠提高焦距和放大倍數(shù),而定義科學(xué)未來的知識(shí)新深度是十年前的人們所無法想象的。上海烈冰科技單細(xì)胞測序烈冰BD Rahpsody單細(xì)胞測序平臺(tái),助力您的深入科學(xué)探究。

關(guān)于單細(xì)胞測序?qū)嶒?yàn)樣本制備,這與流式細(xì)胞術(shù)用戶熟悉的步驟完全一致,也就是通過酶促或機(jī)械消化、細(xì)胞分選或其他細(xì)胞分離技術(shù)從整個(gè)樣本中制備生成活的單細(xì)胞懸液。隨后是細(xì)胞計(jì)數(shù)和質(zhì)量控制步驟,以確保您的樣本有適當(dāng)濃度的活細(xì)胞,并且不含細(xì)胞團(tuán)塊和死細(xì)胞碎片。如有必要,您還可以使用抗體對樣本進(jìn)行染色,標(biāo)記細(xì)胞表面蛋白或其他生物分析物,或者通過FACS來富集感興趣的細(xì)胞類型。解離樣本時(shí)采取的具體步驟將根據(jù)您的起始材料和實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)而定。也許需要額外的制備步驟,具體取決于組織質(zhì)量、樣本豐度、細(xì)胞大小,以及是否需要提取出細(xì)胞核進(jìn)行染色質(zhì)可接近性分析。無論具體的考慮因素如何,所有樣本類型都遵循同一個(gè)基本原則,那就是生成高質(zhì)量的單細(xì)胞懸液。

什么時(shí)候要用到去死細(xì)胞的操作呢?跟進(jìn)烈冰生物多年單細(xì)胞測序服務(wù)經(jīng)驗(yàn)來看,當(dāng)細(xì)胞懸液進(jìn)行質(zhì)量和活性檢測后,考慮對細(xì)胞活性在50%-70%的懸液進(jìn)行去除死細(xì)胞的操作。而太低活性的懸液(小于30%),懸液中細(xì)胞大量死亡,可能已經(jīng)丟失了原組織內(nèi)的細(xì)胞比例和狀態(tài),失真嚴(yán)重,建議重新收集樣本進(jìn)行新的實(shí)驗(yàn),保證數(shù)據(jù)的高質(zhì)量和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。但需要注意到,去除死細(xì)胞的操作會(huì)損失一定的細(xì)胞數(shù)量,因此希望您在提供樣本時(shí),盡可能提供足量的細(xì)胞,以備實(shí)驗(yàn)過程中可能存在的細(xì)胞死亡的問題,BD Rhapsody單細(xì)胞捕獲平臺(tái)對樣本起始細(xì)胞量的要求較低,一般提供10萬個(gè)細(xì)胞以上均可滿足需求,特殊樣本可詳細(xì)咨詢烈冰生物。BD Scanner,是您實(shí)驗(yàn)過程的又一雙眼睛,實(shí)時(shí)監(jiān)測,精細(xì)質(zhì)控。

樣本制備后的保存 為了盡可能地減少轉(zhuǎn)錄組的變化,在對細(xì)胞進(jìn)行清洗和計(jì)數(shù)后,單細(xì)胞懸液應(yīng)當(dāng)保存于冰上,直至用于后續(xù)的上機(jī)和文庫制備步驟。在理想狀況下,一旦制備好樣本,應(yīng)當(dāng)在3min鐘內(nèi)將其用于下游步驟。然而,您還有必要了解各類細(xì)胞的不同性質(zhì),因?yàn)檫@可能會(huì)影響細(xì)胞應(yīng)在冰上保存的時(shí)間,以及它們在制備后多久便應(yīng)當(dāng)被盡快使用。例如,有些細(xì)胞(如PBMC)如果在冰上放置一段時(shí)間,它們就開始形成團(tuán)塊。這些團(tuán)塊很難解離,增加了堵塞的風(fēng)險(xiǎn),而且每個(gè)團(tuán)塊被當(dāng)成單細(xì)胞計(jì)數(shù),又降低了細(xì)胞計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性。此外,有些細(xì)胞更加粘稠,形成團(tuán)塊的速度更快。對于這些細(xì)胞,必須盡量減少制備和使用之間的時(shí)間差。烈冰生物為您提供一站式全流程高通量BD 單細(xì)胞測序服務(wù)。廣州BD VDJ單細(xì)胞平臺(tái)

個(gè)性化制定測序項(xiàng)目方面,滿足從檢測基因到蛋白的多組學(xué)測序要求。烈冰科技單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序

BD Rhapsody單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序是利用單細(xì)胞水平上的高通量測序分析基因表達(dá)譜的技術(shù),突破傳統(tǒng)高通量測序的局限性,針對多種組織類型的樣本,采用BD 細(xì)胞懸液制備protocol組織解離后,單個(gè)樣本一次上機(jī)能捕獲500-10000個(gè)細(xì)胞, 基于每個(gè)細(xì)胞分別建庫測序,獲得單個(gè)細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)和基因表達(dá)狀態(tài),并鑒定細(xì)胞的類型,可以在不同樣本間從細(xì)胞類型的組成和豐度角度進(jìn)行比較,反映細(xì)胞間的異質(zhì)性,提供足夠靈活的定制測定法以滿足多種實(shí)驗(yàn)需要,并有效縮短實(shí)驗(yàn)是時(shí)間和降低測序成本。烈冰科技單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序

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