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磷酸化蛋白的WB第三方檢測(cè)在實(shí)操過(guò)程中有哪些注意事項(xiàng)？細(xì)節(jié)決定成敗，在科研中更是如此。1.一定要在lysisbuffer中加入蛋白酶抑制劑，還要加入一定量的磷酸酶抑制劑，否則即使band壓出來(lái)也會(huì)很淺，結(jié)果也不可信。2.加一抗后比較好4度過(guò)夜，保證抗體有充分的結(jié)合時(shí)間。因?yàn)榱姿峄牡鞍字徽伎偟牡鞍琢康臉O少部分。二抗則室溫1小時(shí)即可。3.磷酸化抗體的好壞是一個(gè)關(guān)鍵因素，所以要選擇好的廠商。務(wù)必找專(zhuān)業(yè)的磷酸化抗體公司訂購(gòu)。4.比較好根據(jù)廠商的protocol來(lái)操作實(shí)驗(yàn)，這是實(shí)驗(yàn)成功的保證。5.抗體的稀釋倍數(shù)也要適當(dāng)。不同廠商也會(huì)有不同要求。

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