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定量實時聚合酶鏈反應（qPCR）廣用于特異性核酸的第三方檢測，RNA轉錄物豐度的測量和高通量實驗結果的驗證。qPCR通常在標準的96孔板上進行，現(xiàn)在實驗室里的qPCR就像移液器和燒杯那樣常見。在引物設計和功能分析方面，NCBI里的數(shù)據(jù)已經(jīng)很多了。但這些數(shù)據(jù)只是理論上的，在具體實驗操作中還要經(jīng)過各種復雜的計算和實驗。在以前的qPCR中，為了使測定正常進行，通常需要進行大量耗時的反復試驗。而現(xiàn)在，這些步驟都可以通過數(shù)據(jù)預實驗來完成。更方便的是，已經(jīng)有人把qPCR實驗中所用到的各種工具都整合到了一個工具箱里。比如，Biosearch這個網(wǎng)站里，就有一個成套的qPCR工具箱OligoToolbox，其中包含的工具能做很多實驗計算工作。瑞普信生物技術有限公司專業(yè)第三方檢測細胞轉染實驗！

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“做miRNA下調，QPCR檢測miRNA，表達水平無變化”如何解決呢？反義核酸是在轉錄后水平發(fā)揮功能，要阻斷miRNA的產(chǎn)生，理想情況是在生成成熟的miRNA之前阻斷。此要求目前唯有CRISPR / Cas9能實現(xiàn)，Cas9通過在pre-miRNA序列中引入突變，從而破壞miRNA表達，是miRNA基因功能缺失研究的一種新方法。福建肖老師運用Cas9技術，針對miR-21基因設計sgRNA ，通過慢病毒遞送細胞，并在RNA水平檢測到mir-21的下調表達，從而研究出miR-21耗竭對CNE2鼻咽（NPC）細胞生物學特性及其潛在機制的影響。使用Cas9敲除miR-21之后，功能上也呈現(xiàn)出陽性，此外，溫醫(yī)大醫(yī)院的張老師使用Cas9敲除mir-545，研究了人環(huán)狀RNA PRKCI（circPRKCI）通過抑制miR-545顯示致性，促進人類神經(jīng)膠質瘤細胞的病理進展3。所以，CRISPR / Cas9對于miRNA的KO是有效的、被認可的、且以QPCR檢測表達量完全沒有問題。甘肅復蘇細胞第三方檢測中心

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