質子泵抑制劑可以通過基于從一個供體蛋白到受體蛋白的能量轉移的物理測量來評估，也可以通過化學測量來評估，在化學測量中，表達的蛋白質與另一種蛋白質之間的相互作用活性可以在刺激時通過適當?shù)膱蟾嫦到y(tǒng)來檢測。后一種基于熒光素酶的方法被稱為生物發(fā)光共振能量轉移(BRET)，它是熒光共振能量轉移研究質子泵抑制劑的替代方法。多個質粒的共轉染也可以應用于轉染，其中包括將編碼Cas9蛋白和引導RNA的質粒遞送到宿主細胞，使用CRISPR/Cas9基因組工程系統(tǒng)進行基因組編輯。除了使用多個質粒外，雙鏈載體是另一種將不同基因傳遞到宿主細胞的方法。雙鏈載體是一種能夠表達兩種不同基因的載體，通過一個內部核糖體進入位點連接，只有一個啟動子。流式細胞術可以更精確地定量表達特定熒光基因的細胞，以評估轉染效率。云南青島轉染試劑

脂質顆粒的加入導致內體DNA釋放增加。Delgado等人通過在腎細胞中添加魚精蛋白，設法提高了固體脂質納米顆粒的轉染效率，但與不添加魚精蛋白的對照組相比，相同的多功能單元，DNA/魚精蛋白/SLN(固體脂質納米顆粒)，降低了HEK 293細胞系(人胚胎腎細胞)的轉染效率。這給了我們希望，通過加入必要的配體的可能性，使用納米顆粒的轉染可能會調整到給定的細胞類型。Bahrami et al.經表明，不同種類的納米顆粒以不同的方式與細胞膜結合。形成這些鍵的差異取決于它們的球形或非球形形狀，也取決于不同納米顆粒所表現(xiàn)出的各種粘附電位以及它們進入后引起的膜形狀變化。Prabha等人的實驗表明，納米顆粒的大小對COS-1(非洲綠猴腎細胞)和HEK 293細胞系的轉染效率有***影響:使用較小的納米顆粒時，轉染效率分別是使用較大納米顆粒的27倍和4倍。在兩種分散體中，小顆粒和大顆粒的細胞攝取、表面電荷和DNA釋放是相同的，這表明使用納米顆粒進行基因傳遞的效率受到許多因素的影響，它們的使用應該根據細胞類型和應用條件進行具體調整。此外，用作納米顆粒分散劑的不同物質，如十六種不同類型納米顆粒的豬肺表面活性劑和牛血清白蛋白，對其在溶液中的團聚有***影響。湖北轉染試劑定制deae-葡聚糖是一種化學修飾的葡聚糖類似物。

選擇合適的轉染試劑可能取決于幾個因素，包括轉染核酸的類型和轉染的復雜性(單轉染或共轉染)。一些試劑如Effectene和TransIT-X2是專門用于質粒DNA轉染的，而一些試劑如Lipofectamine RNAiMAX更適合于小寡核苷酸的轉染。哺乳動物原代細胞由于其有限的壽命和有限的擴增能力，通常比其他細胞類型更不容易受到轉染。非脂質體試劑在轉染人原代細胞方面優(yōu)于脂質體試劑，包括PEC、HASMC和HAEC、人原代成肌細胞和AGS。相比之下，據報道，基于脂質體的試劑(如Lipofectamine和DharmaFECT家族)在轉染其他原代人細胞(如原代臍帶靜脈內皮細胞(HUVEC)和BM-MSC方面比非脂質體試劑產生更高的轉染效率。

由于CRISPR/Cas的發(fā)現(xiàn)，基因組編輯領域經歷了一場**。細菌免疫系統(tǒng)的CRIPSR/Cas成分導致全基因組雙鏈DNA斷裂，并通過內部DNA修復過程促進基因編輯。有研究指出，陽離子聚合物聚乙二胺-環(huán)糊精(PC)有助于編碼Cas9和sgRNA的質粒的有效遞送。當大質粒通過PC傳遞時，它們可以以高N/P比聚結并包裹質粒;這有效地編輯了兩個基因組位點:血紅蛋白亞基β(19.1%)和菱形5同源物1(RHBDF1(7.0%))。研究人員開發(fā)了巨噬細胞特異性啟動子驅動的Cas9表達質粒(pM458和pM330)，并將其包裹在陽離子脂質輔助PEG-b-PLGA納米顆粒中，以解決無法在靶組織和細胞中進行精確基因編輯的問題(CLAN)?；陉栯x子聚合物的基因***在臨床試驗中顯示出巨大的潛力，但由于研究仍處于早期階段，目前大多數(shù)研究都處于臨床前階段?；瘜W轉染的效率可能取決于幾個因素，如使用的試劑類型、靶細胞的來源和性質，以及選擇的DNA與試劑比例。

目前核酸遞送系統(tǒng)的局限性之一是無法深入穿透組織和***，如實體瘤和大腦。通常情況下，只能到達并轉染細胞的外層，從而導致***效果不佳。愛潑斯坦巴爾病毒(EBV)，一種人類**病原體，似乎通過劫持**微環(huán)境中的外泌體進行細胞間通訊來克服這一點。外泌體是小的膜囊泡(40 ~ 200nm)，起源于內吞。在被釋放到細胞外環(huán)境后，由于其表面存在細胞識別分子，它們可以與鄰近細胞融合。外泌體外泌體是細胞間mRNA、小rna (miRNA)和信號因子的載體，通過經歷細胞內化和釋放的幾個周期，能夠跨越幾層組織。它們可以由多種細胞分泌，包括腫瘤細胞、樹突狀細胞、B細胞、T細胞、上皮細胞和神經元。利用外泌體途徑的一種潛在方法是將脂質體核酸重新包裝到外泌體中。這可以通過靶向外泌體特異性的膜蛋白(如四跨蛋白和膜聯(lián)蛋白)并啟動脂質體和外泌體之間的融合事件來實現(xiàn)?；瘜W轉染可分為基于脂質體或非基于脂質體。江蘇轉染試劑指導

用二乙基氨基乙基修飾，右旋糖酐鏈的酰胺化很容易被質子化，這使得它可以自組裝成帶負電荷核酸的納米顆粒。云南青島轉染試劑

基因注射包括通過注射將所需的核酸物質直接輸送到宿主細胞核中。當細胞轉染具有挑戰(zhàn)性時，特別是當需要對宿主細胞進行遺傳修飾時，這種方法是一種很好的替代方法。與其他非病毒基因傳遞方法一樣，沒有一種方法可以適用于所有不同的細胞類型，選擇合適的細胞類型和核酸大小對于確?；蜃⑸涞某晒χ陵P重要。例如，先前的一項研究報道了成功生成表達cre重組酶(大小～1,000bp)的轉基因小鼠細胞系。另一方面，在一項體內研究中，表達轉基因的小鼠肌纖維數(shù)量與注射次數(shù)和給藥質粒劑量相關。另一項體外研究進一步支持了這一觀點，該研究報道了表達報告基因的宿主細胞的數(shù)量與注入細胞的核酸量密切相關。此外，微針的大小、形狀和額外涂層的存在也會影響基因注射的效率，因為有報道稱，涂有微顆粒的小尺寸微針(<10毫米)能夠順利地將所需的貨物輸送到皮膚的角質層。云南青島轉染試劑