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定量蛋白質(zhì)組學分析(QuantitativeProteomics)是對一個基因組表達的全部蛋白質(zhì)或一個復雜混合體系內(nèi)所有蛋白質(zhì)進行精確鑒定和定量??捎糜诤Y選和尋找任何因素引起的樣本之間的差異表達蛋白,結合生物信息學揭示細胞生理病理等功能,同時也可對某些關鍵蛋白進行定性和定量分析。目前定量蛋白質(zhì)組學技術常見標記(Label)和非標記的(LabelFree)定量策略。定量蛋白質(zhì)組學技術常見的幾類主要包括:LabelFree定量蛋白組分析、SILAC與免疫共沉淀蛋白互作分析、MRM/PRM定量蛋白組學分析、SILAC/Dimethyl標記定量蛋白組分析、SWATH定量蛋白組學、TMT/iTRAQ/multinotch定量蛋白組學分析。蛋白質(zhì)組學由此獲得蛋白質(zhì)水平上的關于疾病發(fā)生,細胞代謝等過程的整體而全方面的認識。湖北定量蛋白組學質(zhì)譜分析
我們究竟怎么研究蛋白質(zhì)組學呢?抗體免疫的方法呢,其實就是ELISA,Western及蛋白質(zhì)芯片。通過合成大量蛋白質(zhì)特異的抗體,能夠進行定性檢測及相對定量分析,只要你有好用的抗體,那么就可以通過免疫反應讓抗體快速的識別你感興趣的蛋白質(zhì),然后用例如HRP發(fā)光等標記方法顯示它們是否存在于你的樣品當中。現(xiàn)在已有的抗體不只能識別特定蛋白質(zhì),還能識別特定修飾的特定蛋白質(zhì)或者被特定修飾過的特定蛋白質(zhì)Motif。蛋白質(zhì)組與基因組相對應,也是一個整體的概念。廣東外泌體蛋白質(zhì)組學近兩年來蛋白質(zhì)組研究技術已被應用到各種生命科學領域,如細胞生物學、神經(jīng)生物學等。
PRM靶向蛋白質(zhì)組學:是一種基于Orbitrap為表示的高分辨、高精度質(zhì)譜的離子監(jiān)視技術,首先利用四級桿質(zhì)量分析器的選擇能力,用Q1選擇目標肽段的母離子,隨后在collisioncell中對母離子進行碎裂,然后利用Orbitrap分析器在二級質(zhì)譜中檢測所選擇的母離子窗口內(nèi)的所有碎片信息。這樣能夠?qū)δ繕说鞍踪|(zhì)、目標肽段(如發(fā)生翻譯后修飾的肽段)進行選擇性檢測,即可對目標蛋白質(zhì)/肽段進行相對(一定)定量。從而實現(xiàn)對復雜樣本中的目標蛋白質(zhì)/肽段進行準確地特異性分析。
PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學分析流程是怎樣的?要做PRM首先要明確目標蛋白(或多肽)是什么,設計和建立針對這些目標蛋白PRM質(zhì)譜采集方法,然后對待測樣品進行PRM數(shù)據(jù)采集,將得到的原始譜圖數(shù)據(jù)導入分析軟件提取子離子信息進行定量。另外,如果配制已知濃度的標準肽段,用PRM額外做一個標準曲線,即可實現(xiàn)一定的定量。PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學技術能應用到哪些方面?研究工作中涉及到蛋白或多肽定量的都可以通過PRM技術來實現(xiàn)。具體說來,比如驗證定量蛋白質(zhì)組學中某些蛋白的變化,多肽的相對和一定的定量,想做蛋白定量卻沒有抗體,針對蛋白修飾位點的定量,想同時定量多個蛋白的情況等,都可以用PRM來做。蛋白質(zhì)組的概念與基因組的概念有許多差別。
蛋白質(zhì)組學技術:生物質(zhì)譜:生物質(zhì)譜技術是蛋白質(zhì)組學研究中比較重要的鑒定技術,其基本原理是樣品分子離子化后,根據(jù)不同離子之間的荷質(zhì)比(M/E)的差異來分離并確定分子量。對于經(jīng)過雙向電泳分離的目標蛋白質(zhì)用胰蛋白酶酶解(水解Lys或Arg的-C端形成的肽鍵)成肽段,對這些肽段用質(zhì)譜進行鑒定與分析。目前常用的質(zhì)譜包括兩種:基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)和電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)。蛋白質(zhì)組的研究不但能為生命活動規(guī)律提供物質(zhì)基礎,也能為眾多種疾病機理的闡明及攻克提供理論根據(jù)和解決途徑。在對早老性癡呆等人類重大疾病的臨床診斷和治理方面蛋白質(zhì)組技術也有十分誘人的前景。貴陽DIA定量蛋白質(zhì)組學領域
生物質(zhì)譜技術是蛋白質(zhì)組學研究中比較重要的鑒定技術。湖北定量蛋白組學質(zhì)譜分析
蛋白質(zhì)組的研究不但能為生命活動規(guī)律提供物質(zhì)基礎,也能為眾多種疾病機理的闡明及攻克提供理論根據(jù)和解決途徑。通過對正常個體及病理個體間的蛋白質(zhì)組比較分析,我們可以找到某些“疾病特異性的蛋白質(zhì)分子”,它們可成為新藥物設計的分子靶點,或者也會為疾病的早期診斷提供分子標志。確實,那些世界范圍內(nèi)銷路比較好的藥物本身是蛋白質(zhì)或其作用靶點為某種蛋白質(zhì)分子。因此,蛋白質(zhì)組學研究不只是探索生命奧秘的必須工作,也能為人類健康事業(yè)帶來巨大的利益。蛋白質(zhì)組學的研究是生命科學進入后基因時代的特征。湖北定量蛋白組學質(zhì)譜分析
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