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江蘇琥珀?;揎椀鞍踪|(zhì)組學有哪些類型

來源: 發(fā)布時間:2022-05-11

定量磷酸化蛋白質(zhì)翻譯修飾組學:蛋白質(zhì)發(fā)生磷酸化是重要的翻譯后修飾,它與信號傳導、細胞周期、生長發(fā)育機理等諸多生物學問題有密切關系。研究蛋白質(zhì)磷酸化對闡明蛋白質(zhì)功能具有重要意義。將磷酸化肽段TiO2富集技術和iTRAQ/TMT/Lable free技術相結合,實現(xiàn)對磷酸化蛋白質(zhì)組學的定量研究。技術原理:在磷酸化肽段富集前先進行 iTRAQ/TMT 標記,然后通過 TiO2 富集方法獲得高純度的磷酸化肽段,之后結合高分辨率質(zhì)譜完成對樣品的定量分析。蛋白質(zhì)磷酸化修飾的免疫印跡技術優(yōu)點:檢測特異性高。江蘇琥珀?;揎椀鞍踪|(zhì)組學有哪些類型

泛素化修飾蛋白組學研究:泛素化修飾蛋白組學是一種重要的翻譯后修飾。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)介導了真核生物體內(nèi)80%~85%的蛋白質(zhì)降解。此外,泛素化修飾還可以直接影響蛋白質(zhì)的活性和定位,調(diào)控包括細胞周期、細胞凋亡、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、DNA 損傷修復以及免疫應答等在內(nèi)的多種細胞活動。由于翻譯后修飾的蛋白質(zhì)在生物樣本中含量低、動態(tài)范圍廣,質(zhì)譜分析前需要對修飾進行富集以提高其豐度,然后利用傳統(tǒng)的定量蛋白組分析手段對富集得到的泛素化肽段樣品進行定量分析。北京蛋白質(zhì)乙?;揎椊M學分析研究常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾包括磷酸化。

泛素化修飾蛋白質(zhì)組學樣品要求:1、動物組織的樣品量濕重不少于200mg。2、植物細菌、噬菌體等微生物類樣品量濕重不少于2g。3、富含雜質(zhì)或蛋白質(zhì)含量低的樣品量濕重不少于5g;如植物的根,木質(zhì)部、韌皮部組織等。4、體液類(唾液、羊水、腦脊液等)10mL以上,要保證不能溶血;血清要求500μl以上;尿液要求50mL以上。5、如直接提供蛋白質(zhì)提取物,濃度不少于2 mg/mL,總量不少于1 mg。為保證實驗效果,請盡量告知緩沖液成分,如是否有硫脲、SDS、強離子鹽等等。另樣品中應不含核酸、脂類、多糖等影響分離效果的成分。6、在細胞器蛋白質(zhì)組學方面,提取細胞器或亞細胞器后,蛋白沉淀量在1 mg以上。

泛素化修飾蛋白質(zhì)組技術原理:首先將蛋白樣本酶解成肽段混合物,然后使用液相色譜對酶解后的肽段混合物進行組分分離以降低樣本復雜程度,然后通過高質(zhì)量的泛素化修飾類抗體和生物材料對修飾肽段進行富集,之后上樣至液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜中進行分析定量。技術優(yōu)勢:1、高特異性的修飾類泛抗體;2、高分辨率、高靈敏度質(zhì)譜儀;應用領域:泛素化修飾還參與了細胞周期、增殖、細胞凋亡、分化、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、基因表達、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、信號傳遞、損傷修復、炎癥免疫等幾乎一切生命活動的調(diào)控。泛素化心血管等疾病的發(fā)病密切相關。因此,作為近年來生物化學研究的一個重大成果,它已然成為研究、開發(fā)新藥物的新靶點。自中而下的蛋白質(zhì)組學技術可用于組蛋白修飾的分析。

蛋白質(zhì)翻譯后修飾加入的官能團反應有:1、乙?;ǔS诘鞍踪|(zhì)的N末端加入乙酰。2、烷基化——加入如甲基或乙基等烷基。3、甲基化——烷基化中常見的一種,在賴氨酸、精氨酸等的側鏈氨基上加入甲基。4、生物素化——用生物素附加物令保存的賴氨酸酰化。5、谷氨酸化——在谷氨酸與導管素及其他蛋白質(zhì)之間建立共價鍵。6、甘氨酸化——在一個至超過40種甘氨酸與導管素的C末端建立共價鍵。7、糖化——將糖基加入天冬酰胺、羥離氨酸、絲氨酸或蘇氨酸,形成糖蛋白。8、異戊二烯化——加入如法呢醇及四異戊二烯等異戊二烯。9、硫辛酸化——附著硫辛酸的功能性。蛋白質(zhì)糖基化修飾組學技術怎么確定位點?河南糖基化修飾蛋白質(zhì)組學技術服務

蛋白質(zhì)磷酸化修飾的免疫印跡技術優(yōu)點:能夠特異鑒定單個磷酸化位點。江蘇琥珀?;揎椀鞍踪|(zhì)組學有哪些類型

蛋白質(zhì)翻譯后修飾介紹:蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTMs)是指蛋白質(zhì)在翻譯中或翻譯后的化學修飾過程。蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTMs)通過給蛋白質(zhì)添加磷酸酯,乙酸酯,酰胺基或甲基等官能團增加蛋白質(zhì)組的功能多樣性,并影響正常細胞生物學和發(fā)病機理的幾乎所有方面。蛋白質(zhì)翻譯后修飾在許多細胞過程中起著關鍵作用,如細胞分化、蛋白質(zhì)降解、信號傳導和調(diào)節(jié)過程、基因表達調(diào)節(jié)以及蛋白質(zhì)相互作用。蛋白質(zhì)翻譯后修飾PTMs通常包括磷酸化,糖基化,泛素化,亞硝基化,甲基化,乙?;?,脂質(zhì)化和蛋白水解。因此,PTM的特征(包括修飾類別和修飾位點)在細胞生物學以及疾病診斷和預防研究中至關重要。江蘇琥珀?;揎椀鞍踪|(zhì)組學有哪些類型