蛋白磷酸化修飾過程:蛋白磷酸化修飾這一過程是通過蛋白激酶催化,將磷酸基團從ATP轉(zhuǎn)移到多肽底物的絲氨酸、蘇氨酸,或酪氨酸殘基上。并且磷酸化修飾的過程是可逆的,去磷酸化反應由蛋白磷酸酶催化完成。蛋白磷酸化檢測方法:Western Blot檢測方法:Western Blot是檢測蛋白磷酸化水平的常用方法,主要過程為先利用SDS-PAGE分離蛋白質(zhì),隨后將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF膜上,然后使用特異性識別磷酸化蛋白的抗體來鑒定目標蛋白的磷酸化水平。只有被磷酸化修飾的蛋白才會在相應分子質(zhì)量的地方顯現(xiàn)特異性蛋白條帶。蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學具有全方面性。河南乙?;揎椀鞍踪|(zhì)組學鑒定
翻譯后修飾蛋白組學分析:在蛋白翻譯后修飾方式的鑒定過程中,蛋白會首先被酶切成肽段,然后進入質(zhì)譜進行分析。通過質(zhì)譜分析,得到的是一系列肽段的分子質(zhì)量信息。對于某一個特定肽段而言,在沒有發(fā)生任何翻譯后修飾的情況下,其序列信息和分子量是確定的。當它發(fā)生了某種翻譯后修飾之后,例如磷酸化修飾,由于序列信息和分子量是確定的,磷酸根的分子量也是確定的。在質(zhì)譜檢測過程中發(fā)現(xiàn)其中的部分肽段的分子量剛好增加了一個磷酸根的分子量,假設這個肽段就發(fā)生了磷酸化修飾,再通過二級質(zhì)譜圖進行二次確認。濟南蛋白質(zhì)乙?;揎椊M學類型蛋白質(zhì)乙?;揎?,顧名思義指的就是在蛋白質(zhì)原有基礎上面嫁接上乙?;鶊F。
蛋白質(zhì)學組翻譯后修飾的研究策略:目前,有幾種分析蛋白質(zhì)翻譯后修飾的策略,包括質(zhì)譜(MS)、Eastern blotting、放射性標記和Western blotting。放射性標記和Western blotting是比較傳統(tǒng)、特異性和相對定量的方法。該過程需要事先知道翻譯后修飾類型。局限性包括抗體的特異性和可用性。質(zhì)譜技術也常被用于翻譯后修飾分析,不受修飾類型和相關修飾位點的現(xiàn)有知識的限制。自下而上:自下而上的技術是蛋白質(zhì)組學研究中使用的質(zhì)譜策略之一。在根據(jù)序列鑒定肽之前,需要使用蛋白酶消化蛋白質(zhì)。由于該技術不能保證在檢測過程中被檢測肽的完整性和穩(wěn)定性,因此無法獲得不同蛋白質(zhì)翻譯后修飾之間關系的信息,這意味著它無法檢測到某些修飾。因此,該方法不適用于分析組蛋白的組合翻譯后修飾。
蛋白質(zhì)修飾位點分析:基于LC-MS/MS分析能夠精確測定蛋白質(zhì)或多肽分子質(zhì)量這一特性,從而檢測蛋白質(zhì)或者多肽上位點發(fā)生何種修飾??蓹z測修飾類型如下: 磷酸化、糖基化、乙?;?、泛素化、丙?;⒍□;⒈;?、戊二酰化、琥珀?;?、單甲基化、二甲基化、三甲基化。1、磷酸化:信號轉(zhuǎn)導、細胞周期、生長發(fā)育機理等;2、糖基化:蛋白質(zhì)折疊、更新以及免疫應答等;3、乙?;夯虮磉_調(diào)控、細胞凋亡、細胞代謝、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性以及神經(jīng)退行性的病變等;4、泛素化:細胞周期、細胞凋亡、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、DNA修復以及信號轉(zhuǎn)導等;5、甲基化:染色質(zhì)結(jié)構(gòu)及轉(zhuǎn)錄調(diào)控等;6、丙?;?/ 丙二?;?/ 戊二酰化 / 琥珀?;褐饕嬖谟诰€粒體和細菌中,與代謝過程密切相關。質(zhì)譜可以用于已知和未知的翻譯后修飾檢測。
蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學:血漿蛋白糖基化修飾分析:蛋白質(zhì)糖基化指碳水化合物通過共翻譯或翻譯后修飾的方式附著到蛋白質(zhì)上的過程,是一種常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾。分泌的細胞外蛋白常被糖基化,糖基化蛋白通常是重要的整合膜蛋白。血漿中的蛋白質(zhì)包括維持機體正常生理狀態(tài)的蛋白質(zhì)和機體分泌、滲漏、脫落的蛋白質(zhì),其中不乏存在一些糖基化蛋白質(zhì)。而蛋白質(zhì)糖基化修飾不只影響蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象、生物活性、運輸和定位,而且在分子識別、細胞通信、信號轉(zhuǎn)導等特定生物過程中發(fā)揮著至關重要的作用。因此對血漿蛋白糖基化進行分析,有助于研究血漿蛋白的生理功能等。蛋白質(zhì)發(fā)生翻譯后修飾時其分子質(zhì)量會發(fā)生響應的改變,通過質(zhì)譜能夠精確測定蛋白質(zhì)或多肽的分子質(zhì)量。貴陽蛋白質(zhì)琥珀?;揎椊M學費用
蛋白質(zhì)翻譯后修飾是指對翻譯后的蛋白質(zhì)進行共價加工的過程。河南乙?;揎椀鞍踪|(zhì)組學鑒定
什么是蛋白質(zhì)的翻譯后修飾?蛋白質(zhì)的翻譯后修飾()是指蛋白質(zhì)在翻譯后的化學修飾。對于大部分的蛋白質(zhì)來說,這是蛋白質(zhì)生物合成的較后步驟。PTM是細胞信號傳導中的重要組成部分。通過向修飾基團添加一個或多個氨基酸殘基或通過蛋白質(zhì)水解切割該基團來改變蛋白質(zhì)的性質(zhì),是蛋白質(zhì)生物學功能表達的重要步驟。生物蛋白質(zhì)的翻譯后修飾極大地增加了蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的類型和功能。這個過程調(diào)節(jié)細胞周期和蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄,并影響表觀遺傳學。河南乙?;揎椀鞍踪|(zhì)組學鑒定
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