外泌體的功能外泌體可能作為細(xì)胞之間物質(zhì)和信號(hào)通訊的途徑，不同的細(xì)胞通過(guò)分泌攜帶不同組分的外泌體實(shí)現(xiàn)細(xì)胞間通訊，這些外泌體被受體細(xì)胞吸收，通過(guò)物質(zhì)交換或釋放內(nèi)含物實(shí)現(xiàn)物質(zhì)和信號(hào)的交流。外泌體與受體細(xì)胞的信息交流可能通過(guò)以下4種途徑實(shí)現(xiàn):外泌體表面膜蛋白質(zhì)被目的細(xì)胞表面的受體識(shí)別，從而靶細(xì)胞;外泌體在蛋白酶作用下產(chǎn)生的表面膜蛋白質(zhì)碎片可作為目的細(xì)胞表面受體的配體;外泌體脂膜可以與目的細(xì)胞膜融合，將蛋白質(zhì)和RNA等內(nèi)容物釋放進(jìn)去，此類膜融合可能改變靶細(xì)胞的一些膜特性，例如脂質(zhì)和膜蛋白質(zhì)的密度及種類;目的細(xì)胞通過(guò)胞吞的形式攝入外泌體經(jīng)由以上幾種途徑，外泌體將其攜帶的生物信息運(yùn)輸?shù)街苓叞屑?xì)胞或經(jīng)血液等體液運(yùn)輸而被遠(yuǎn)處組織細(xì)胞攝取，進(jìn)而影響目的細(xì)胞的基本功能和基因表達(dá)。幾乎所有的細(xì)胞都可以在自發(fā)或在一定刺激條件下產(chǎn)生外泌體，不同的細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體具有不同的功能，這些外泌體參與了一系列生理和病理過(guò)程，如發(fā)生與發(fā)展、抗原呈遞、免疫調(diào)節(jié)、組織愈合等。此外，外泌體與疾病的研究表明：外泌體可能在代謝性疾病的出現(xiàn)以及心血管健康中發(fā)揮作用。細(xì)胞污染的處理的技術(shù)。寧夏大鼠科研技術(shù)服務(wù)實(shí)驗(yàn)

    注意事項(xiàng)1.病毒包裝的幾個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)主要包括：細(xì)胞因素、載體系統(tǒng)(盡量使用成熟的商業(yè)化載體系統(tǒng))、構(gòu)建重組的質(zhì)粒正確與否、質(zhì)粒抽提純化情況、包裝轉(zhuǎn)染控制(24、48小時(shí)的細(xì)胞及熒光狀態(tài)判斷)、目的基因?qū)?span style="color:#f5c81c;">病毒包裝影響(基因大小、序列情況、蛋白功能毒性等都會(huì)影響到是否能包裝成功)。，需要觀察包裝病毒后的48h培養(yǎng)基顏色是否橙紅。3.病毒濃縮：病毒一般在48h和72h各收一次。如果不想濃縮病毒的話，也可以直接將收集的病毒上清作為要的細(xì)胞的培養(yǎng)基，但是可能效果會(huì)不太好。并且一般收病毒時(shí)，培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)已經(jīng)損耗了很多，那樣直接培養(yǎng)細(xì)胞會(huì)損害細(xì)胞，所以建議還是進(jìn)行濃縮后再。常見(jiàn)問(wèn)題1.包裝病毒時(shí)293T細(xì)胞狀態(tài)不好，或者鋪得過(guò)密，可以選擇放棄該次實(shí)驗(yàn)。2.目的載體過(guò)大，不易。3.避免轉(zhuǎn)染過(guò)程以及后續(xù)過(guò)程出現(xiàn)的污染。海南外包科研技術(shù)服務(wù)實(shí)驗(yàn)干貨分享 | TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡原理和經(jīng)驗(yàn).

    圖2MAZTER-Seq實(shí)驗(yàn)流程圖圖3MAZTER-MINE分析m6A示意圖接下來(lái)作者便是要驗(yàn)證這一新方法的可行性了。在酵母中敲除IME4的情況下，檢測(cè)到的剪切效率高于野生型（剪切效率高低m6A水平），m6A抗體富集后的樣品剪切效率也低于未富集的Input組。整體水平可靠，那檢測(cè)的特異性位點(diǎn)是否準(zhǔn)確呢？作者也將該方法檢測(cè)到的新甲基化位點(diǎn)使用放射標(biāo)記層析檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)預(yù)測(cè)的位點(diǎn)準(zhǔn)確存在而且與剪切效率相符合。如圖5所示。而圖6中，作者則是與m6A抗體IP的方法進(jìn)行了比較，也證實(shí)了這一方法的可行性。圖5MAZTER-Seq檢測(cè)結(jié)果驗(yàn)證圖6MAZTER-Seq與m6A-Seq比較分析此外，后文中作者也在大規(guī)模的CRISPR-Cas9改變m6A狀態(tài)和酵母減數(shù)分裂模型中檢測(cè)了MAZTER-Seq這一系統(tǒng)；并進(jìn)一步通過(guò)這一方法檢測(cè)了哺乳動(dòng)物不同細(xì)胞間m6A水平的保守性；也探究了去甲基化酶FTO對(duì)整體m6A甲基化水平的影響等。這里小編主要給大家分享這一新技術(shù)，其他部分暫不過(guò)多分析了。新的技術(shù)能拓展我們的研究?jī)?nèi)容；對(duì)于這一技術(shù)。

    3）基因/蛋白質(zhì)表達(dá)定性或定量檢測(cè)在進(jìn)行分子檢測(cè)的過(guò)程中，保持核酸和蛋白質(zhì)的完整性至關(guān)重要，因此在取樣過(guò)程中，應(yīng)盡量避免核酸及蛋白質(zhì)的降解。如不注意采樣過(guò)程，將會(huì)導(dǎo)致樣本中的核酸及蛋白質(zhì)的無(wú)差別降解，嚴(yán)重影響后續(xù)分子檢測(cè)結(jié)果。在條件允許的情況下，樣本在離體后應(yīng)立刻裝入凍存管內(nèi)，并立即放入液氮中進(jìn)行冷凍。在RNA提取樣本的保存過(guò)程中，可以選擇非冷凍型RNA保存液或Trizol試劑進(jìn)行RNA酶的。針對(duì)蛋白質(zhì)提取樣本的保存，我們同樣可以使用商品化的蛋白酶劑進(jìn)行短期處理。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PolymeraseChnReaction，PCR）及免印跡（Westernblotting，WB），這兩種實(shí)驗(yàn)手段是分子學(xué)檢測(cè)中不可或缺的一部分，也是發(fā)表至關(guān)重要的分子檢測(cè)數(shù)據(jù)。PCR主要用來(lái)對(duì)基因在基因組層面或轉(zhuǎn)錄層面的變化進(jìn)行定性或定量檢測(cè)，而WB則主要用來(lái)對(duì)某一蛋白質(zhì)的表達(dá)進(jìn)行定量檢測(cè)。（4）轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)及代謝組學(xué)檢測(cè)隨著檢測(cè)水平及相關(guān)產(chǎn)業(yè)的不斷發(fā)展，各類組學(xué)檢測(cè)的價(jià)格降低，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中也常常運(yùn)用組學(xué)檢測(cè)來(lái)提升實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的檔次。在我們進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組學(xué)及蛋白質(zhì)組學(xué)的檢測(cè)過(guò)程中，同樣是要首先確保目標(biāo)RNA或蛋白質(zhì)的片段完整性。實(shí)驗(yàn)干貨 | 常用分子生物學(xué)技術(shù)原理.

    小鼠尾尖用酒精擦拭尾巴，引起輕微的血管擴(kuò)張；用無(wú)菌手術(shù)刀、刀片或鋒利的剪刀，快速截?cái)嘈∈笪布?-2毫米。如果需要多次，之后每次需截除2-3毫米；從尾部像尾尖方向按摩，增加血流；用采集血液；結(jié)束后，按壓傷口或使用止血?jiǎng)﹣?lái)止血；每次量大約可達(dá)。小鼠眼球取血單手保定好小鼠；必要時(shí)剪掉小鼠胡須，防止污染血液；輕壓取血側(cè)眼部皮膚，使眼球充血突出；用彎頭鑷夾取眼球并快速在摘??；同時(shí)用左手中指輕按小鼠心臟部位，以加快心臟泵血速度；當(dāng)血液流盡時(shí)，用脫臼法處死小鼠；大鼠眼眶取血先將小鼠進(jìn)行麻醉，大鼠翻正反射消失時(shí)不在繼續(xù)麻醉；抗凝處理過(guò)的玻璃毛細(xì)采樣管，掰成2-3厘米長(zhǎng)度；右手食指和拇指輕按眼眶兩側(cè)皮膚，使眼球突出，毛細(xì)管從內(nèi)側(cè)的眼球與眼瞼的縫隙處進(jìn)入，輕輕旋轉(zhuǎn)毛細(xì)管，稍微深入眼球后上方，血液流速快的時(shí)候4-5滴即可，溫柔的將毛細(xì)管取出；用棉簽按壓大鼠眼眶止血，每次可取血50-100微升，將血液放入冰盒中保存。小鼠心臟取血先將小鼠麻醉，稍靠右側(cè)平躺在手術(shù)板上固定；左側(cè)第三四根肋骨間觸摸心臟，跳動(dòng)明顯，慢慢進(jìn)針；針有回血停止進(jìn)針，開(kāi)始取血；一次可以300到500微升，小鼠存活，放到加熱墊上待小鼠蘇醒后放入籠中。動(dòng)物疾病模型是一種用于研究人類疾病的重要工具。湖北動(dòng)物科研技術(shù)服務(wù)實(shí)驗(yàn)室

常見(jiàn)的5種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物取血方式，你掌握幾種？寧夏大鼠科研技術(shù)服務(wù)實(shí)驗(yàn)

    保存于嚴(yán)密緊塞或加蓋的容器里，同時(shí)在容器外上標(biāo)簽，并隨同材料在溶液中投入相應(yīng)的標(biāo)簽，以免相互混淆。標(biāo)簽上注明固定液、材料來(lái)源、日期等。標(biāo)簽上的文字，應(yīng)用黑色鉛筆或繪圖黑墨水書寫。3.脫水注意事項(xiàng)（1）脫水原理：乙醇與石蠟不相溶，而二甲苯既能溶于乙醇又能溶于石蠟。當(dāng)組織中全部被二甲苯占有時(shí)，光線可以透過(guò)，組織呈現(xiàn)出不同程度的透明狀態(tài)。（2）脫水必須在有蓋的玻璃品中進(jìn)行，防止吸收空氣中的水分。（3）在更換高一級(jí)的脫水劑時(shí)，不要移動(dòng)材料以免損壞，可用吸管吸出器皿中的脫水劑，再用吸水吸盡器皿內(nèi)剩余液，然后于皿中加入高一級(jí)脫水劑。（4）在低濃度酒精中，每級(jí)停留不宜太長(zhǎng)，否則易使組織變軟，助長(zhǎng)材料的解體。（5）在高濃度或純酒精中，每級(jí)停留的時(shí)間也不宜太長(zhǎng)，否則會(huì)使組織變脆，影響切片。（6）如需過(guò)夜，應(yīng)停留在70%酒精中。（7）脫水必須徹底，否則不易透明，甚至使透明劑內(nèi)出現(xiàn)白色混濁現(xiàn)象。4.透明注意事項(xiàng)（1）使用透明劑時(shí)，要隨時(shí)蓋緊蓋子，以免空氣中的水分進(jìn)入。（2）更換每級(jí)透明劑，動(dòng)作要迅速，一方面為了不使材料塊干涸，另一方面能避免吸收濕氣。（3）在透明過(guò)程中，如果材料周圍出現(xiàn)白色霧狀，說(shuō)明材料中的水未被脫凈。寧夏大鼠科研技術(shù)服務(wù)實(shí)驗(yàn)