培養(yǎng)液的滲透壓是一個(gè)非常重要的因素,細(xì)胞通?？赡褪?60mOsm/kg～320mOsm/kg。標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)液的滲透壓在此范圍內(nèi)波動(dòng)。特別注意：向培養(yǎng)液中加入其它物質(zhì)有可能會(huì)明顯改變培養(yǎng)液的滲透壓，特別是溶于強(qiáng)酸或強(qiáng)堿中的物質(zhì)。向培養(yǎng)液中添加HEPES時(shí)需按以下方法調(diào)節(jié)鈉離子濃度。緩沖系統(tǒng)大多數(shù)細(xì)胞所需pH在-。但是，細(xì)胞培養(yǎng)適pH值隨培養(yǎng)的細(xì)胞種類不同而不同。成纖維細(xì)胞喜歡較高pH(-),而傳代轉(zhuǎn)化細(xì)胞系則需要偏酸pH(-)。由于多數(shù)培養(yǎng)液靠碳酸氫鈉（NaHCO3）與CO2體系進(jìn)行緩沖，因此，氣相中的CO2濃度應(yīng)與培養(yǎng)液中碳酸氫鈉濃度相平衡。如果氣相或培養(yǎng)箱空氣中CO2濃度設(shè)定在5％，培養(yǎng)液中NaHCO3的加入量為；如果CO2濃度維持在10％，培養(yǎng)液中NaHCO3的加入量為。細(xì)胞培養(yǎng)瓶蓋不應(yīng)擰得太緊，以保證氣體交換。HEPES是一種非離子緩沖液，在pH-范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力，但是非常昂貴，在高濃度時(shí)對一些細(xì)胞可能有毒。HEPES緩沖液可與低水平的碳酸鈉（）共用，以抵消因額外加入HEPES引起的滲透壓增加。在這種培養(yǎng)條件下，細(xì)胞培養(yǎng)瓶的蓋子應(yīng)擰緊，以防止培養(yǎng)液中所需的少量碳酸鹽散入空氣中。大多數(shù)培養(yǎng)液中含有酚紅作為pH指示劑，酸性培養(yǎng)液呈橙黃色，堿性培養(yǎng)液呈深紅色。TNM-FH昆蟲培養(yǎng)基不含蛋白質(zhì)、脂類或任何生長因子，故此產(chǎn)品需搭配血清或無血清添加物使用。江蘇iclean細(xì)胞培養(yǎng)基供應(yīng)商家

    無血清培養(yǎng)基中通常需要添加一些額外的組分，才能幫助細(xì)胞貼壁生長，包括以下幾大類物質(zhì)：1）促貼壁物質(zhì)：一般為細(xì)胞外基質(zhì)，如纖連蛋白、層粘連蛋白等。它們還是重要的分裂素以及維持正常細(xì)胞功能的分化因子，對許多細(xì)胞的繁殖和分化，起著重要作用。纖連蛋白主要促進(jìn)來自中胚層細(xì)胞的貼壁與分化，這些細(xì)胞包括成纖維細(xì)胞、肉瘤細(xì)胞、粒細(xì)胞、腎上皮細(xì)胞、腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞、CHO細(xì)胞、成肌細(xì)胞等。2）促生長因子：針對不同細(xì)胞添加不同的生長因子。也是刺激細(xì)胞生長、維持細(xì)胞功能的重要物質(zhì)，有些是許多細(xì)胞必不可少的，如胰島素。3）酶抑制劑：培養(yǎng)貼壁生長的細(xì)胞，需要用胰酶消化傳代，在無血清培養(yǎng)基中需含酶抑制劑，以終止酶的消化作用，達(dá)到保護(hù)細(xì)胞的目的。常用的是大豆胰酶抑制劑。4）結(jié)合蛋白和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白：常見如轉(zhuǎn)鐵蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加量比較大，可增加培養(yǎng)基的粘度，保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷。許多旋轉(zhuǎn)式培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基都含有牛血清白蛋白。5）微量元素：硒是常見的。廣東醫(yī)療細(xì)胞培養(yǎng)基廠家直銷M199有兩種平衡鹽成分，Earle’s鹽成分常用于CO2環(huán)境，Hank’s鹽成分用于非CO2的環(huán)境。

    MEMα是一種改良的MEM培養(yǎng)基，與MEM培養(yǎng)基相比MEMα培養(yǎng)基營養(yǎng)更為豐富，在MEM的基礎(chǔ)上又添加了NEAA、**酸鈉、硫酸鋅、VB12、生物素、抗壞血酸等成分，廣泛應(yīng)用于各種哺乳動(dòng)物懸浮和貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)。不含核苷和脫氧核苷的MEMα培養(yǎng)基常常用作DG44和其他DHFR-缺陷型細(xì)胞的篩選培養(yǎng)基。L-丙氨酰-L-谷氨酰胺（Alanyl-glutamine，Ala-Glu），又名丙氨酰谷氨酰胺、丙谷二肽，是一種高級細(xì)胞培養(yǎng)添加劑，可直接替代細(xì)胞培養(yǎng)基中的L-谷氨酰胺。L-谷氨酰胺（Glutamine）是細(xì)胞培養(yǎng)中所必需的一種營養(yǎng)素，但其在溶液中不穩(wěn)定，會(huì)自發(fā)降解生成氨和焦谷氨酸，其中氨對細(xì)胞有害；而L-丙氨酰-L-谷氨酰胺在水溶液中十分的穩(wěn)定，不會(huì)自發(fā)的降解。細(xì)胞利用其機(jī)制是：在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞會(huì)逐漸向培養(yǎng)液中釋放一種肽酶，將L-丙氨酰-L-谷氨酰水解成L-丙氨酸和L-谷氨酰胺，而后細(xì)胞會(huì)將這兩種水解產(chǎn)物吸收利用。細(xì)胞利用L-丙氨酰-L-谷氨酰的過程與流加培養(yǎng)策略相似，連續(xù)的將低濃度水平的L-谷氨酰胺加入到培養(yǎng)液中，從而提高了L-谷氨酰胺的利用率，且不會(huì)生成多余的氨，更利于細(xì)胞的生長。L-丙氨酰-L-谷氨?？梢源娴饶柕腖-谷氨酰胺，適用于所有的細(xì)胞，幾乎無需適應(yīng)。

    細(xì)胞培養(yǎng)基的種類按照細(xì)胞培養(yǎng)基的發(fā)展歷史，細(xì)胞培養(yǎng)基大致可分為平衡鹽溶液、天然細(xì)胞培養(yǎng)基、合成細(xì)胞培養(yǎng)基、無血清細(xì)胞培養(yǎng)基、限定化學(xué)成分細(xì)胞培養(yǎng)基等幾大種類。（balancedsaltsolution，BSS）BSS主要是由無機(jī)鹽、葡萄糖組成，它的作用是維持細(xì)胞滲透壓平衡，保持pH穩(wěn)定及提供簡單的營養(yǎng)。其主要用于細(xì)胞的漂洗、配制其他試劑等。幾種常用的BSS配方如下（表1-1）。D-Hank's與Hank's的一個(gè)主要區(qū)別是前者不含有Ca2+和Mg2+，因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。因?yàn)镃a2+、Mg2+是細(xì)胞膜的重要組成成份，參與細(xì)胞粘附等功能，使用不含Ca2+、Mg2+的BSS可避免細(xì)胞結(jié)團(tuán)。此外，Hanks液和Earle液是常用的BSS基礎(chǔ)溶液，前者緩沖能力較弱，適合于密閉培養(yǎng)；后者緩沖能力較強(qiáng)，適合于5%CO2的培養(yǎng)條件。表1-1幾種常用的BSS配方。即開即用液體配方，DMEM/F12節(jié)省配制時(shí)間，提升實(shí)驗(yàn)效率。

    1.細(xì)胞培養(yǎng)基的種類按照細(xì)胞培養(yǎng)基的發(fā)展歷史，細(xì)胞培養(yǎng)基大致可分為平衡鹽溶液、天然細(xì)胞培養(yǎng)基、合成細(xì)胞培養(yǎng)基、無血清細(xì)胞培養(yǎng)基、限定化學(xué)成分細(xì)胞培養(yǎng)基等幾大種類。（balancedsaltsolution，BSS）BSS主要是由無機(jī)鹽、葡萄糖組成，它的作用是維持細(xì)胞滲透壓平衡，保持pH穩(wěn)定及提供簡單的營養(yǎng)。其主要用于細(xì)胞的漂洗、配制其他試劑等。幾種常用的BSS配方如下（表1-1）。D-Hank's與Hank's的一個(gè)主要區(qū)別是前者不含有Ca2+和Mg2+，因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。因?yàn)镃a2+、Mg2+是細(xì)胞膜的重要組成成份，參與細(xì)胞粘附等功能，使用不含Ca2+、Mg2+的BSS可避免細(xì)胞結(jié)團(tuán)。此外，Hanks液和Earle液是常用的BSS基礎(chǔ)溶液，前者緩沖能力較弱，適合于密閉培養(yǎng)；后者緩沖能力較強(qiáng)，適合于5%CO2的培養(yǎng)條件。天然培養(yǎng)基指來自動(dòng)物體液或利用組織分離提取的一類培養(yǎng)基，如血漿、血清、雞胚浸出液等。其優(yōu)點(diǎn)是營養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果良好，但缺點(diǎn)是成分復(fù)雜，來源受限且制作過程復(fù)雜、批間差異大。目前使用的天然培養(yǎng)基是血清，另外各種組織提取液、促進(jìn)細(xì)胞貼壁的膠原類物質(zhì)在培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也是必不可少。水解乳蛋白是乳白蛋白經(jīng)蛋白酶和肽酶水解的產(chǎn)物。DMEM/F12培養(yǎng)基是在DMEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，添加F12培養(yǎng)基中更為豐富的營養(yǎng)成分。江蘇iclean細(xì)胞培養(yǎng)基供應(yīng)商家

Fischer’s培養(yǎng)基不含蛋白質(zhì)、脂類或任何生長因子，故此產(chǎn)品需搭配血清或無血清添加物使用。江蘇iclean細(xì)胞培養(yǎng)基供應(yīng)商家

    Leibovitz’sL-15培養(yǎng)基的緩沖系統(tǒng)由磷酸鹽和游離堿基氨基酸組成，代替了傳統(tǒng)的碳酸氫鈉緩沖系統(tǒng)，同時(shí)，用半乳糖和**酸鈉代替葡萄糖可以防止酸性代謝副產(chǎn)物的形成，有助于維持培養(yǎng)液PH的穩(wěn)定，適合用于非CO2平衡環(huán)境的細(xì)胞培養(yǎng)。Leibovitz’sL-15培養(yǎng)基適用于猴腎細(xì)胞和HEP-2的培養(yǎng)、原代（如胚胎和成人組織）細(xì)胞分離、多種病毒的培養(yǎng)以及神經(jīng)元的培養(yǎng)等。NEAA（非必須氨基酸），是在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加L-丙氨酸、L-谷氨酸、L-天（門）冬酰胺、L-天（門）冬氨酸、L-脯氨酸、L-絲氨酸和甘氨酸7種NEAA，能降低細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞自身生產(chǎn)非必須氨基酸的副作用，有效促進(jìn)細(xì)胞增殖代謝。酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為PH值的指示劑，用以持續(xù)監(jiān)測培養(yǎng)液的酸堿度，在低PH值時(shí)酚紅使培養(yǎng)液呈黃色，而較高的PH值時(shí)使培養(yǎng)液呈紫色，PH值～，適合細(xì)胞培養(yǎng)。但酚紅也有一些缺點(diǎn)，研究表明酚紅可以模擬固醇類（特別是雌）的作用，因此在用到雌敏感的細(xì)胞時(shí)（如乳腺組織），較好使用不含酚紅的培養(yǎng)基。酚紅會(huì)干擾流式細(xì)胞分析時(shí)候的檢測。此外，一些無血清培養(yǎng)基的配方中若存在酚紅會(huì)干擾鈉-鉀平衡。 江蘇iclean細(xì)胞培養(yǎng)基供應(yīng)商家

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