HE染色法,石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一。蘇木精染液為堿性,主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍(lán)色;伊紅為酸性染料,主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色。去氧核糖核酸(DNA)兩條鏈上的磷酸基向外,帶負(fù)電荷,呈酸性,很容易與帶正電荷的蘇木精堿性染料以離子鍵結(jié)合而被染色。蘇木精在堿性溶液中稱藍(lán)色,所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色。伊紅Y是一種化學(xué)合成的酸性染料,在水中離解成帶負(fù)電荷的陰離子,與蛋白質(zhì)的氨基正電荷的陽(yáng)離子結(jié)合使胞漿染色,細(xì)胞漿、紅細(xì)胞、肌肉、結(jié)締組織、嗜伊紅顆粒等被染成不同程度的紅色或粉紅色,與藍(lán)色的細(xì)胞核形成鮮明對(duì)比。伊紅是細(xì)胞漿的良好染料。由于組織或細(xì)胞的不同成分對(duì)蘇木精的親和力不同及染色性質(zhì)不一樣。經(jīng)蘇木精染色后,細(xì)胞核及鈣鹽粘液等呈藍(lán)色,可用鹽酸酒精分化和弱堿性溶液顯藍(lán),如處理適宜,可使細(xì)胞核著清楚的深藍(lán)色,胞漿等其它成分脫色。再利用胞漿染料伊紅染胞漿,使胞漿的各種不同成分又呈現(xiàn)出深淺不同的粉紅色。故各種組織或細(xì)胞成分與病變的一般形態(tài)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)均可顯示出來(lái)。HE染色需要哪些材料及實(shí)驗(yàn)步驟。天津結(jié)果客觀的HE染色分析
HE染色是目前國(guó)內(nèi)外病理診斷上***采用的常規(guī)染色方法。切片質(zhì)量的好壞,可直接影響疾病診斷的及時(shí)與準(zhǔn)確性。因此,能制作出一張高質(zhì)量的HE染色切片,是必須掌握的技術(shù)之一。送檢樣本經(jīng)4%多聚甲醛固定,固定狀態(tài)良好后,嚴(yán)格按照本單位病理實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SOP程序進(jìn)行修剪、脫水、包埋、切片、染色、封片***鏡檢合格的樣片。在顯微鏡下瀏覽切片或?yàn)g覽數(shù)字切片,在不同倍數(shù)下詳細(xì)觀察組織切片情況,對(duì)切片中基本病理改變?nèi)绯溲?、淤血、出血、水腫、變性、壞死、增生、纖維化、機(jī)化、肉芽組織、炎性變化等情況文字描述,并反映出片子之間的差異。對(duì)典型病變部位成像并在word文檔中用箭頭標(biāo)識(shí)。重慶質(zhì)量好的HE染色公司HE染色的實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊约皩?shí)驗(yàn)結(jié)果分析。
HE染色觀察肝臟HE染色切片,首先要在顯微鏡下找到肝臟的標(biāo)志性結(jié)構(gòu)——肝小葉。顯微鏡首先調(diào)4倍物鏡,調(diào)準(zhǔn)焦螺旋至視野清晰,可以看到肝小葉結(jié)構(gòu)。人的肝小葉之間結(jié)締組織少,小葉分隔不明顯,但動(dòng)物如豬或小鼠,其肝小葉分界非常明顯。肝小葉**有**靜脈,在橫切片上顯示為空洞。肝小葉之間為將物鏡調(diào)制10倍或20倍,就可以清楚地看到肝小葉結(jié)構(gòu)。肝細(xì)胞以**靜脈為中心向周圍放射狀排列,稱為肝板。一般在20倍物鏡下可以清晰看到肝細(xì)胞。20倍物鏡下,肝細(xì)胞內(nèi)染色為藍(lán)色的是細(xì)胞核,細(xì)胞核大而圓,居中,異染色質(zhì)少而著色淺,能清晰看到核仁。肝細(xì)胞胞質(zhì)豐富,多成嗜酸性,當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)合成旺盛時(shí),胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)散在的嗜堿性物質(zhì)。肝細(xì)胞內(nèi)有豐富的細(xì)胞器比如溶酶體、高爾基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng),等等,但是在光鏡下是無(wú)法看到的,需要在電鏡下才能觀察到。當(dāng)然,肝小葉內(nèi)除了肝細(xì)胞,還有膽小管、肝血竇、肝巨噬細(xì)胞等組織形態(tài),但是在HE染色時(shí)并不容易觀察到。做肝臟HE染色切片主要目的一般都是為了觀察肝細(xì)胞形態(tài)是否完整、胞核有無(wú)增大、肝小葉形態(tài)是否完整,以檢測(cè)藥物等刺激因素對(duì)肝臟的損傷作用。
HE染色堿染料染主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著色。學(xué)上常用的一種染色方法為蘇木精 伊紅染色法。蘇木精 伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ,簡(jiǎn)稱HE染色法 ,石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一 。蘇木精染液為堿 ,主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍(lán)色 ;伊紅為酸染料 ,主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色 。細(xì)胞核被蘇木精染成鮮明的藍(lán)色,軟骨基質(zhì)、鈣鹽顆粒呈深藍(lán)色,粘液呈灰藍(lán)色。細(xì)胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色,胞漿內(nèi)嗜酸顆粒呈強(qiáng)的鮮紅色。膠原纖維呈淡粉紅色,力纖維呈亮粉紅色,紅血球呈橘紅色,蛋白液體呈粉紅色。冰凍組織切片的HE染色。
HE染色脫蠟不凈的原因及驗(yàn)證方法:1)二甲苯使用過(guò)久,含蠟成分太高或脫蠟效果差:可更換二甲苯驗(yàn)證。2)切片經(jīng)烤片,冷卻后放入二甲苯脫蠟或室溫太低;延長(zhǎng)拖拉時(shí)間或用熱的切片脫蠟驗(yàn)證。3)脫蠟時(shí)間太短或振蕩太少,幅度太小;可延長(zhǎng)脫蠟時(shí)間或以多振蕩來(lái)驗(yàn)證。4)洗滌二甲苯用的乙醇使用時(shí)間過(guò)久,導(dǎo)致乙醇中二甲苯含量過(guò)高,二甲苯殘留在切片上(由于二甲苯與水不相溶,切片上有二甲苯的地方,蘇木精就沒(méi)有辦法滲透進(jìn)去,在切片染色完成后留下了點(diǎn)狀的不著**域):更換各道乙醇驗(yàn)證。5)二甲苯、乙醇質(zhì)量不佳(偶有試劑瓶?jī)?nèi)裝的試劑與試劑名不相符):換批號(hào)驗(yàn)證。6)更換脫蠟液體時(shí)試劑拿錯(cuò):需重新配置驗(yàn)證。7)更換脫蠟液體時(shí)試劑次序放錯(cuò):需重新配置驗(yàn)證。8)烤片時(shí)間短,切片上水分沒(méi)有烤干,也會(huì)導(dǎo)致著色不勻,出現(xiàn)點(diǎn)狀發(fā)白區(qū)域。HE染色 ,石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一。山東結(jié)果客觀的HE染色
HE染色,即是蘇木精-伊紅染色法,是形態(tài)學(xué)比較常用的染色方法。天津結(jié)果客觀的HE染色分析
HE染色實(shí)驗(yàn)步驟:(1)樣品制備:對(duì)于貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞,胰酶消化,調(diào)整細(xì)胞濃度約1×105/ml,滴加于蓋玻片上(置于6孔板中),培養(yǎng)相應(yīng)時(shí)間后,取出細(xì)胞爬片,用PBS洗滌3次。(2)樣品固定:95%乙醇固定20min,PBS洗滌2次,每次1min。(3)染核:蘇木素染液染色2-3min,自來(lái)水洗滌。(4)分色:鏡下觀察,若細(xì)胞核染色過(guò)深,用1%鹽酸酒精溶液分色數(shù)秒,自來(lái)水洗滌。(5)染胞質(zhì):浸入伊紅染液染色1min,自來(lái)水洗滌。(6)吹干或自然晾干細(xì)胞爬片后,中性樹(shù)膠封片。若細(xì)胞用4%多聚甲醛固定,則染色時(shí)間相應(yīng)延長(zhǎng),蘇木素染色12-15min,伊紅5min即可天津結(jié)果客觀的HE染色分析